Новый метод объективного и быстрого определения основных показателей фертильности спермы

Российский кардиологический научно-производственный комплекс МЗ РФ^*, Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН^**, Москва

Проблемы репродукции, 2-1999, с.67-70

В начало...

Нами обследовано 74 мужчины, состоящих в бесплодном браке в возрасте от 21 до 42 лет. Распределение пациентов в зависимости от принятых характеристик спермограмм следующее: нормозооспермия 45%, астенозооспермия 18%, олигозооспермия 14%, олигоастенозооспермия 12%, тератозооспермия 7%, азооспермия 4%. Результаты определения концентрации сперматозоидов в камере Маклера и в спермоанализаторе показаны на рис. 2. Коэффициент корреляции Спирмана равен 0,97 (n=74, р<0,001), что говорит о хорошем соответствии показаний нового метода общепринятому с помощью микроскопа. Несколько меньшее соответствие результатов двух методов наблюдалось при определении подвижности клеток. Коэффициент корреляции Спирмана составил 0,62 (n=74, р<0,001) для подвижных сперматозоидов категории А+Б и 0,73 (n=74, р<0,001) для активно подвижных клеток категории А. Однако, новый метод регистрировал более высокую подвижность клеток в образцах, чем это получалось при исследовании с помощью микроскопа (44% и 32% для категории А+Б, 11% и 9% для категории А соответственно). Вероятно, это связано с тем, что в наших экспериментах поддерживалась стабильная и более высокая температура камеры 37?С, чем при исследовании с помощью микроскопа при температуре помещения 22-26?С.

Рис. 2. Результаты определения концентрации сперматозоидов в камере Маклера и в спермоанализаторе.

Для изучения зависимости получаемых результатов от соотношения подвижных и неподвижных клеток в пробе использовали ряд разведений образцов спермы с нормальными показателями подвижности сперматозоидов. Для этого образец разделяли на две равные части, где одну пробу хранили при температуре 22-26?С, а вторую подвергали воздействию высокой температуры (60?С) в течение 5 минут, что вызывало прекращение двигательной активности сперматозоидов. Затем аликвоты нативного эякулята смешивали с обездвиженными клетками в разных пропорциях и исследовали с помощью спермоанализатора. Результаты этого эксперимента приведены на рис. 3, где данные представлены в виде среднего среднеквадратичного отклонения в 5 измерениях. Как следует из рисунка, метод регистрирует линейную зависимость подвижности сперматозоидов от степени разбавления неподвижными клетками при сохранении одинаковой концентрации.

Рис. 3. Изменение показателей эякулята по данным спермоанализатора в зависимости от степени его разведения неподвижными аутологичными сперматозоидами. - концентрация (млн/мл), - % подвижных, - % активно подвижных.

Также проведено исследование на спермоанализаторе показателей эякулята в зависимости от степени его разведения семенной жидкостью, лишенной сперматозоидов (рис. 4). В связи с чем для изменения количества клеток в пробе образец делили на две равные части. Один объем хранили при температуре 22-26?С, второй центрифугировали при 1000xg в течение 10 мин для получения бесклеточного супернатанта. Аликвоты нативного эякулята смешивали с бесклеточным эякулятом в разных пропорциях и определяли показатели полученных проб с помощью спермоанализатора. Анализ данных показал, что новый метод регистрирует линейное уменьшение концентрации сперматозоидов в зависимости от степени разбавления, в то время как процентный состав подвижных и активно подвижных клеток сохраняется практически неизменным.

Рис. 4. Изменение показателей эякулята по данным спермоанализатора в зависимости от степени его разведения семенной жидкостью без сперматозоидов. - концентрация (млн/мл), - % подвижных, - % активно подвижных.

Результаты проведенных исследований нативного эякулята и выполненных специальных экспериментов для доказательства точности определения основных показателей сперматозоидов свидетельствуют, что предложенный прибор адекватно и корректно регистрирует концентрацию и подвижность сперматозоидов. К достоинствам метода относится возможность исследования спермы в неразбавленной среде, высокая точность и воспроизводимость получаемых результатов, а также простота и небольшое время проведения анализа. Использование такого методического подхода в клинической практике позволит быстро и точно оценивать основные дискриминационные параметры спермы и выявлять мужской фактор бесплодия, что в дальнейшем поможет определить тактику ведения бесплодной пары. Несомненным достоинством прибора является возможность его использования в лабораториях вспомогательных методов репродукции.

Литература

1. Blasco L. Clinical tests of sperm fertilizing ability. Fertil Steril 1984; 41: 177.

2. Dohlberg В. Sperm motility in fertile men and males in infertile units: in vitro test. Arch Androl 1988; 20: 509.

3. Mulligan M.P., Harris S., Dannis K.J. Comparison of sperm velocity in fertile and infertile groups as measured by time-lapse photography. Fertil Steril 1980; 34: 509.

4. Hinting A., Comhair F., Schoonjans F. Capacity of objectively assessed sperm motility characteristics in differentiating between semen of fertile and subfertile men. Fertil Steril 1988; 50: 635.

5. Knuth U.A., Yeung C.H., Nieschlag E. Computerized semen analysis: objective measurement of semen characteristics is biased by subjective parameter setting. Fertil Steril 1987; 48: 118.

6. Vantman D., Banks S.M., Koukoulis G., Dennison L., Sherins R.J. Assessment of sperm motion characteristics from fertile and infertile men using a fully automated computer-assisted semen analyzer. Fertil Steril 1989; 51: 156.

7. Bartoov В., Sneider М., Ben-Barak J., Yogev L., Mayevsky A., Lightman A. Sperm motility index: a new parameter for human sperm evaluation. Fertil Steril 1991; 56: 108.

8. Gabbasov Z.A., Gavrilov I.Yu., Popov E.G. The use of optical density fluctuations for determination of platelet concentration in stirred suspension. Platelets 1992; 3: 281.