|
А.Р. Галеева, Е.Б. Юрьев, И.Р. Валинурова, Э.К. Хуснутдинова
Лаборатория молекулярной генетики человека отдела биохимии и цитохимии Уфимского научного центра РАН
В начало...
Методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК проведен анализ полиморфизма локусов TaqI А и NcoI гена
D2-рецептора дофамина (DRD2) у 170 мужчин русской и татарской национальности с острым алкогольным психозом. Установлено отсутствие популяционных различий в распределении частот генотипов и аллелей гена DRD2 между исследованными популяциями. Выявлены различия в распределениях частот генотипов локуса TaqI A и гаплотипов гена DRD2 между группами больных и контролем той же национальности, причем для русских эти различия оказались достоверными. Полученные результаты позволяют предположить, что среди мужчин с алкогольной зависимостью происходит отбор, направленный на элиминацию лиц с гаплотипами, несущими аллели А1
и N2 и гомозиготными по одному из этих аллелей. Этим, возможно, объясняются снижение частоты генотипов локуса TaqI A, несущих аллель А1, в первую очередь гомозигот А1/А1, и потеря гаплотипов локусов TaqI A и NcoI гена DRD2 - A1N1N2, A1A2N2 у мужчин с острым алкогольным психозом по сравнению с контролем.
Известно, что в этиологии алкоголизма наряду с социальными важную роль играют генетические факторы [2, 7, 8]. В связи с этим исследователями разных стран ведется интенсивный поиск молекулярно-генетических маркеров предрасположенности к этому заболеванию. В указанном аспекте большое внимание уделяется деятельности нейромедиаторных систем, в частности дофаминергической [1, 8, 11]. Было установлено, что из разных типов дофаминовых рецепторов высоким сродством к алкоголю отличается D2-рецептор, который и рассматривается в качестве одного из основных генов - кандидатов формирования алкогольной зависимости [4, 19].
У человека ген D2-рецептора дофамина (DRD2) расположен на 11-й хромосоме в области q22-23 и идентифицируется TaqI A (локализован в 3'-некодирующем регионе) [9] и NcoI (расположен на экзоне 6) [18] полиморфизмами длины рестрикционных фрагментов. Обнаружены популяционные различия в распределении частот аллелей и генотипов гена DRD2. Так, среди белых европейцев частота аллеля А1 в среднем равна 0,25 [5], тогда как в популяциях Японии и Тайваня она значительно выше - соответственно 0,37 и 0,38 [6, 10].
Цель настоящего исследования состояла в изучении роли DRD2 в патогенезе острого алкогольного психоза у мужчин разной этнической принадлежности - русских и татар, относящихся соответственно к восточнославянской и тюркской группам народностей.
Обследовали 170 мужчин (106 русских и 64 татарина) в возрасте от 25 до 70 лет. Все они в период обследования находились на лечении в Республиканской психиатрической больнице N 2 (Уфа) по поводу острого алкогольного психоза. В контрольную группу были включены 116 мужчин (62 русских и 54 татарина) той же возрастной группы, не состоявшие на учете у психиатра или нарколога и не злоупотреблявшие алкоголем.
ДНК выделяли методом фенольно-хлороформной экстракции [13]. Анализ TaqI A и NcoI полиморфизмов локуса гена DRD2 проводили методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК с использованием следующих олигонуклеотидных праймеров:
TaqI A: ССGTCGACGGCTGGCCAAGTTGTCTA,
CCGTCGACCCTTCCTGAGTGTCATCA;
NcoI: ATCCTGCAGCCATGG,
ATTGTCCGGCTTTACC.
После денатурации (3 мин при 94?С) выполняли 35 циклов амплификации по схеме: отжиг праймеров - 1 мин при 58?С, синтез ДНК - 1 мин при 72?С, денатурация - 1 мин при 94?С. Затем пробы выдерживали 10 мин при 72?С и охлаждали. После этого 10 мкл амплификата обрабатывали 5 ед. рестриктазы TaqI A в течение 4 ч при 65?С [10]. В результате данной реакции аллель А1 оставался интактным, а аллель А2 подвергался ферментативному гидролизу с образованием двух фрагментов длиной 130 и 180 пар оснований. Для оценки NcoI полиморфизма 10 мкл амплификата обрабатывали 5 ед. рестриктазы NcoI в течение 16 ч при 37?С [6]. В этом случае интактным оставался аллель N1, тогда как аллель N2 распадался на два фрагмента длиной 194 и 252 пар оснований. Фрагменты ДНК разделяли электрофоретически в 6% полиакриламидном геле, окрашивали бромидом этидия и идентифицировали в УФ-свете.
Статистическую обработку данных проводили методом  2 с использованием компьютерной программы R C (Rows Columns) на основе алгоритма, описанного D. Roff и P. Bentzen [17].
Результаты исследования представлены в табл. 1 и табл. 2. Во всех изученных выборках распределение частот генотипов локусов TaqI A и NcoI гена DRD2 соответствовало распределению Харди - Вайнберга.
| Таблица 1. Распределение частот генотипов и аллелей локусов TaqI A и NcoI гена DRD2 у больных с острым алкогольным психозом и в контрольных группах |
| Группа |
n |
Частота TaqI A генотипов |
Частота TaqI A аллелей |
Частота NcoI генотипов |
Частота NcoI аллелей |
| А 1/А1 |
А1/А2 |
А2/А2 |
А1 |
А2 |
N1/N1 |
N1/N2 |
N2/N2 |
N1 |
N2 |
| Русские |
| Kонтрольная |
62 |
0,05 |
0,44 |
0,52 |
0,27 |
0,73 |
0,40 |
0,45 |
0,15 |
0,63 |
0,37 |
| Больные |
106 |
0,00 |
0,37 |
0,63 |
0,18 |
0,82 |
0,32 |
0,50 |
0,18 |
0,57 |
0,43 |
| 35 лет и моложе |
45 |
0,00 |
0,36 |
0,64 |
0,18 |
0,82 |
0,27 |
0,53 |
0,20 |
0,53 |
0,47 |
| cтарше 35 лет |
61 |
0,00 |
0,38 |
0,62 |
0,19 |
0,81 |
0,36 |
0,48 |
0,16 |
0,60 |
0,40 |
| Татары |
| Kонтрольная |
54 |
0,11 |
0,44 |
0,44 |
0,33 |
0,67 |
0,33 |
0,46 |
0,20 |
0,57 |
0,43 |
| Больные |
64 |
0,05 |
0,39 |
0,56 |
0,24 |
0,76 |
0,35 |
0,41 |
0,24 |
0,56 |
0,44 |
| 35 лет и моложе |
28 |
0,04 |
0,33 |
0,63 |
0,20 |
0,80 |
0,26 |
0,41 |
0,33 |
0,46 |
0,54 |
| cтарше 35 лет |
36 |
0,06 |
0,44 |
0,50 |
0,28 |
0,72 |
0,42 |
0,42 |
0,17 |
0,63 |
0,37 |
При оценке распределения частот генотипов локуса TaqI A гена DRD2 в контрольных группах достоверных различий не обнаружено. И у русских, и у татар самым редким был генотип А1/А1, тогда как генотипы А1/А2 и А2/А2 встречались практически с равной частотой. В группах больных с острым алкогольным психозом обращала на себя внимание тенденция к снижению частоты гомозигот А1/А1 и увеличению частоты генотипа А2/А2 по сравнению с контрольными группами той же национальности. Так, среди 106 русских больных гомозиготы по аллелю А1 вообще отсутствовали, а частота генотипа А2/А2 была на 0,11 выше наблюдавшейся в контрольной выборке. Эти различия оказались статистически значимыми (c2 = 6,48; p<0,027). У татар с острым алкогольным психозом отмечалось увеличение частоты генотипа А2/А2 на 0,12 в первую очередь вследствие снижения частоты генотипа А1/А1 более чем вдвое по сравнению с контролем, но различия недостоверны. Различия между выборками больных разной национальности были недостоверны при р<0,05 (2=5,34;p=0,071).
| Таблица 2. Распределение частот гаплотипов локусов TaqI A и NcoI гена DRD2 у больных с острым алкогольным психозом и в контрольных группах |
| Группа |
Гаплотип |
| А1N1 |
A1N1N2 |
А1N2 |
А1А2N1 |
А1А2N1N2 |
А1А2N2 |
А2N1 |
А2N1N2 |
А2N2 |
| Русские |
| Kонтрольная |
0,03 |
0,02 |
0,00 |
0,24 |
0,15 |
0,05 |
0,13 |
0,29 |
0,10 |
| Больные |
0,00 |
0,00 |
0,00 |
0,12 |
0,23 |
0,02 |
0,20 |
0,27 |
0,16 |
| 35 лет и моложе |
0,00 |
0,00 |
0,00 |
0,09 |
0,24 |
0,02 |
0,18 |
0,29 |
0,18 |
| cтарше 35 лет |
0,00 |
0,00 |
0,00 |
0,15 |
0,21 |
0,02 |
0,21 |
0,26 |
0,15 |
| Татары |
| Kонтрольная |
0,07 |
0,04 |
0,00 |
0,15 |
0,19 |
0,11 |
0,11 |
0,24 |
0,09 |
| Больные |
0,05 |
0,00 |
0,00 |
0,20 |
0,16 |
0,03 |
0,09 |
0,27 |
0,20 |
| 35 лет и моложе |
0,04 |
0,00 |
0,00 |
0,18 |
0,11 |
0,04 |
0,04 |
0,32 |
0,29 |
| старше 35 лет |
0,06 |
0,00 |
0,00 |
0,22 |
0,19 |
0,03 |
0,14 |
0,22 |
0,14 |
| Примечание. Число больных то же, что в табл. 1. |
Далее...
Написать комментарий
|
