|
Воробьев А.А., Селезнев А.С., Павлова Л.А., Янг А., Ершова Н.Н. Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова
В начало...
Проведено изучение антимикробного действия препарата "Томатол" на лабораторные штаммы Escherichia coli АТСС 25922, Staphylococcus aureus ATCC 6538-P и Candida albicans АТСС 885-653, а также клинические штаммы Enterobacter spp., Streptococcus spp, Staphylococcus spp, Klebsiella spp и Escherichia spp. Показано, что препарат "Томатол" обладает широким спектром антимикробного действия, включающим грамположительные и грамотрицательные микроорганизмы и грибы рода Candida. Данные ТСХ свидетельствуют, что антимикробным компонентом препарата является комплекс органических кислот (янтарная, лимонная, винная и др.).Ключевые слова:
В народной медицине различных стран мира широко используются свежие помидоры и сок из них при заболеваниях желудочно-кишечного тракта, сердечно-сосудистых заболеваниях и нарушениях обмена веществ. Имеются данные об их способности снижать артериальное давление и уровень холестерина в крови. Наружно мякоть и сок томатов применяются для лечения гнойных ран, чесотки, ожогов, экзем, рожистых воспалений, фурункулеза и пролежней [1-5, 8].
Плоды томатов содержат (в мг%): каротиноиды - 0,52-10,4; аскорбиновую кислоту - 0,06; витамины РР - 0,04-0,19; В1 - 0,53-0,96; В2 - 0,39; В6 - 0,34-0,4. В мякоти плодов томатов преобладают органические кислоты, общее содержание которых составляет 0,35-0,84 г% [1, 4, 6, 7].
Благодаря высокому содержанию каротиноидов томаты рассматриваются как перспективное сырье для получения препаратов антиоксидантного действия. В Институте физической химии РАН получен препарат "Томатол", который был рекомендован к применению как антиатеросклеротическое и радиопротекторное средство. В состав "Томатола" входят (в масс%): диглицериды - 34; фосфолипиды - 29; свободные жирные кислоты - 20; стерины - 9; ликопин 4-6; токоферолы - 2,5; другие каротиноиды - 0,5.
Учитывая исходный состав сырья и метод получения препарата, можно было предположить наличие у препарата антибактериальной активности.
Целью нашей работы явилось изучение антимикробных свойств препарата "Томатола".
"Томатол" представляет собой маслянистую жидкость, темно-коричневого цвета с характерным запахом. Препарат нерастворим в воде, хорошо растворим в органических растворителях (хлороформ, эфир и др.) [1, 6].
Антибактериальную активность препарата изучали на тест-штаммах, рекомендованных ГФ XI: Escherichia coli АТСС 25922, Staphylococcus aureus АТСС 6538-P и Candida albicans АТСС 885-653; также были использованы 160 клинических полирезистентных штаммов Enterobacter spp., Streptococcus spp., Staphylococcus spp., Klebsiella spp. и Escherichia spp.
Изучение антимикробной активности препарата "Томатол" проводили методом диффузии в агар, используемым для определения антибактериальной активности. Для этого готовили двухслойные среды следующего состава: нижний слой - агар - 20 г, КН2РО4 - 3 г, вода дистиллированная - 1 л, рН 6,8-7,0; верхний слой - бульон Хоттингера - 135 мг% аминного азота, агар - 10 г, КН2РО4 - 3 г, вода дистиллированная - 1 л, рН 6,8-7,0. В верхний слой вносили культуру бактерий из расчета 20 тыс. микробных клеток/мл. В полученной среде делали лунки диаметром 8 мм, в которые вносили препарат в различных разведениях. Для сравнения использовали водные растворы молочной кислоты и сангвиритрина.
Антибиотикочувствительность тест-штаммов и клинических штаммов определяли с использованием стандартных дисков антибиотиков и противогрибковых препаратов.
Динамику антибактерильного действия "Томатола" исследовали при добавлении к 10-часовой культуре штаммов Escherichia coli АТСС 25922 и Staphylococcus aureus ATCC 6538-P препарата, в концентрации, равной МПК. Количество жизнеспособных бактерий определяли каждый час с помощью высева.
Идентификацию антимикробного фактора в препарате проводили методом тонкослойной хроматографии (ТСХ). В качестве носителя использовали пластины "Silufol-254" ("Kavalier", Чехия), предварительно прогретые при 100?С в течение 10 мин. Подвижной фазой служила смесь н-бутанол- муравьиная кислота - вода в соотношении 6:1:2, для проявления использовали 0,1% раствор 2,6-дихлорфенилиндофенолята натрия.
Суммарное количество органических кислот определяли методом кислотно-основного титрования 0,1 н. NaOH. Индикаторы - 1 % спиртовой раствор фенолфталеина и 0,1% водный раствор метиленового синего.
Изучение гидрофильной и липофильной фракций "Томатола" показало, что антибактериальный фактор находится в гидрофильной части (табл. 1). Незначительное различие в зонах задержки роста в препарате и водной вытяжке и отсутствие антибактериального действия у масляного обезвоженного остатка свидетельствуют о полном переходе антимикробного компонента в водную фракцию. Это позволяет ожидать хорошего проникновения препарата в ткани организма. Действие самого препарата и его водной вытяжки показало, что активность в отношении тест-штаммов не зависит от видовой принадлежности микробов: ингибируется грамположительные и грамотрицательные бактерии и Candida albicans в равной степени. Сравнение зон задержки роста для водной вытяжки "Томатола" показало, что его активность вполне сопоставима с действием 10% водного раствора молочной кислоты и 1% водного раствора сангвиритрина. Однако МПК "Томатола" (20% раствор) значительно выше, чем у этих препаратов.
| Таблица 1. Оценка антибактериальной активности "Томатола" |
| Исследуемые вещества |
Kонцентрация, % |
Зоны задержки роста, мм |
| S.aureus |
E.coli |
С.albicans |
| "Томатол" |
|
39 0,2 |
36 0,2 |
35 0,2 |
| Масляный остаток |
|
- |
- |
- |
| Водное извлечение |
100 |
24 0,2 |
35 0,6 |
30 0,1 |
| 50 |
21 0,4 |
22 0,1 |
21 0,6 |
| 40 |
18 0,6 |
20 0,4 |
18 0,6 |
| 30 |
15 0,3 |
14 0,2 |
16 0,2 |
| 20 |
14 0,2 |
12 0,1 |
12 0,l |
| 10 |
- |
- |
- |
| 5 |
- |
- |
- |
| Kислота молочная |
10 |
30 0,3 |
29 0,1 |
34 0,2 |
| 8 |
28 0,1 |
27 0,1 |
32 0,3 |
| 6 |
27 0,3 |
25 0,2 |
30 0,1 |
| 4 |
25 0,2 |
23 0,1 |
26 0,3 |
| 2 |
23 0,1 |
14 0,2 |
20 0,4 |
| Сангвиритрин водный раствор |
1 |
23 0,6 |
26 0,2 |
32 0,6 |
| 0,5 |
20 0,1 |
24 0,5 |
30 0,4 |
| 0,1 |
18 0,4 |
21 0,8 |
26 0,7 |
| 0,05 |
15 0,2 |
18 0,2 |
19 0,3 |
| 0,01 |
13 0,4 |
16 0,5 |
16 0,1 |
| 0,001 |
- |
- |
- |
Активность "Томатола" в отношении клинических штаммов была практически такой же, как в случае тест-штаммов, независимо от вида и степени антибиотикорезистентности. Для сравнительной оценки активности антибиотиков и "Томатола" были использованы 160 клинических штаммов, выделенных от женщин, страдающих вагинитами и вагинозами.
Результаты исследований показали, что практически все изученные клинические штаммы были полирезистентными. Устойчивость к различным антибиотикам колебалась в пределах от 30 до 85%. Антибиотики, к которым наблюдалась наибольшая устойчивость, были как длительно используемые в клинике - олеандомицин, полимиксин, новобиоцин, доксициклин, так и более современные препараты - цефтазидим, цефуроксим, азлоциллин, ципрофлоксацин, клиндамицин. Наиболее эффективным антибиотиком был гентамицин - устойчивость к нему была выявлена не более чем у 30% выделенных штаммов. В отличие от этих результатов, количество устойчивых к "Томатолу" штаммов составляло 7% (табл. 2).
| Таблица 2. Сравнительная оценка устойчивости клинических штаммов к различным антибактериальным препаратам |
| Препарат |
Kоличество испытуемых штаммов |
Kоличество устойчивых штаммов |
% устойчивых штаммов |
| Ристомицин |
64 |
40 |
62,5 |
| Стрептомицин |
64 |
28 |
43,7 |
| Полимиксин B |
64 |
54 |
84,3 |
| Неомицин |
64 |
37 |
57,8 |
| Доксициклин |
64 |
37 |
57,8 |
| Пенициллин |
64 |
43 |
67,2 |
| Новобиоцин |
64 |
35 |
54,7 |
| Мономицин |
64 |
23 |
35,9 |
| Kанамицин |
64 |
28 |
43,7 |
| Олеандомицин |
64 |
41 |
64,0 |
| Тетрациклин |
64 |
30 |
46,9 |
| Kарбенициллин |
64 |
26 |
40,6 |
| Метициллин |
64 |
38 |
59,4 |
| Гентамицин |
64 |
19 |
29,7 |
| Оксациллин |
64 |
30 |
46,9 |
| Цефтазидим |
64 |
49 |
76,5 |
| Цефуроксим |
64 |
30 |
46,9 |
| Ципрофлоксацин |
9 |
3 |
33,0 |
| Азлоциллин |
24 |
8 |
33,0 |
| Kлиндамицин |
39 |
16 |
41,0 |
| Нитрофурантоин |
26 |
19 |
73,0 |
| Метронидазол |
42 |
18 |
42,8 |
| Пимафуцин |
19 |
15 |
78,9 |
| Kлотримазол |
17 |
9 |
52,9 |
| Сангвиритрин |
64 |
2 |
3,2 |
| Томатол |
99 |
7 |
7,0 |
Далее...
Написать комментарий
|
