|
В.К. Окулич, С.А. Сенькович, А.Н. Косинец Витебский государственный медицинский университет, г. Витебск, Беларусь.
В начало...
(Окончание)
При сравнении амилазной активности у больных с гнойными процессами, у которых из гнойного очага были выделены различные виды микроорганизмов, не прослеживалось четкой зависимости между видом микроорганизма и уровнем амилазной активности Ig больных.
При исследовании БАПНА-амидазной активности IgG было выявлено, что активность IgG, выделенных от больных, у которых из раневого отделяемого высевались грамотрицательные палочки (Pseudomonas aeruginosa, Proteus mirabilis), была выше, чем у IgG, выделенных от больных, у которых высевались грамположительные кокки (Staphylococcus aureus, Staphylococcus capitis, Staphylococcus epidermidis), но это отличие было недостоверным (см. табл. 4).
| Таблица 4. Зависимость уровня БАПНА-амидазной активности Ig от вида микрофлоры, выделенной от больного |
| Микрофлора, выделенная от больных |
Средний уровень БАПНА-амидазной активности Ig (пкат) |
Достоверность |
| Грамотрицательные палочки |
0,42+0,078 (n=19) |
Р>0,05 |
| Грамположительные кокки |
0,283+0,057 (n=12) |
|
При исследовании микроорганизмов высокий уровень БАПНА-амидазной активности был выявлен у 100% штаммов Pseudomonas aeruginosa. У Proteus mirabilis обладали высокой активностью 90% штаммов. У Proteus vulgaris обнаруживали активность в 100% случаев. Среди штаммов Escherichia coli активность высокой степени выявлена у 60,87%. Среди штаммов Acinetobacter baumannii активность высокой степени не обнаружена. Из 9 исследованных штаммов рода Enterobacter высокая активность обнаружена у 11,1%. Также расщепляла БАПНА Klebsiella pneumoniae - 100% (4 штамма - 0,705+0,194 пкат), Klebsiella oxytoca - 50% (2 штамма -0,782+0,501). В то же время 100% штаммов Staphylococcus aureus активностью не обладали. Микроорганизмы видов Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus capitis , Morganella morganii, (1 штамм) БАПНА-амидазной активностью не обладали (см. табл. 5).
| Таблица 5. Результаты исследования БАПНА-амидазной активности микроорганизмов |
| Вид микроорганизма |
Количество исследованных штамов |
% высоко активных (>1 пкат) |
Средний уровень активности (пкат) |
| Грамотрицательные палочки |
Pseudomonas aeroginosa |
31 |
31 (100%) |
2,631+0,16 |
| Esherichia coli |
23 |
14 (60,87%) |
1,27+0,17 |
| Proteus mirabilis |
20 |
18 (90%) |
3,02+0,31 |
| Acinetobacter baumannii |
8 |
0 (0%) |
0,447+0,11 |
| Enterobacter spp. |
9 |
1 (11,1%) |
0,617+0,402 |
| Proteus vulgaris |
5 |
5 (100%) |
1,88+0,33 |
| Всего |
94 |
79 (84,04%) |
2,13+0,14 |
| Грамположительные кокки |
Staphylococcus aureus |
26 |
0 (0%) |
0 |
| Staphylococcus capitis et epidermidis |
9 |
0 (0%) |
0 |
| Всего |
35 |
0 (0%) |
0 |
При исследовании зависимости уровня ДНК-азной активности иммуноглобулинов от вида микроорганизмов, выделенных от больных, оказалось, что средний уровень активности у лиц, от которых высевался золотистый стафилококк (ДНК-азня активность видовой признак), был выше, чем у больных, от которых высевалась микрофлора, не обладавшая ДНК-азной активностью, но это отличие было недостоверным (соответственно 24,5+3,85 УЕ, n=17 и 13,73+5,33 УЕ, n=15). В группе лиц, от которых был высеян золотистый стафилококк, частота встречаемости больных с достоверно повышенным уровнем ДНК-азной активности иммуноглобулинов была достоверно выше, чем у больных, от которых высевались микроорганизмы, не обладающие ДНК-азной активностью (соответственно 58,82%; 10 из 17 и 20%; 3 из 15, P<0,05).
Заключение
Основной целью нашей работы явилось исследование образования абзимов в ответ на ферменты агрессии и инвазии микроорганизмов, вызвавших инфекционный процесс. Гнойно-воспалительные процессы при хирургической инфекции протекают, как правило, очень интенсивно с поступлением в организм больного большого количества ферментов и других продуктов жизнедеятельности микроорганизмов. Вследствие этого, в соответствии с теорией идиотип-антиидиотипического взаимодействия можно ожидать выработки большого количества антител с ферментными свойствами.
В результате проведенных нами исследований было установлено, что у лиц с инфекционным процессом наблюдается повышенный уровень иммуноглобулинов с ферментативными свойствами. Этот факт подтверждает предположение о том, что длительное антигенное воздействие микробными ферментами стимулирует образование иммуноглобулинов с ферментными свойствами. Полученные данные свидетельствующие о зависимости уровня абзимной активности от вида микроорганизма, вызвавшего патологический процесс и наличия у него определенных видов ферментной активности, указывают на то, что образование антител с ферментными свойствами, связанное с инфекционным процессом, протекает по антиидиотипическому механизму.
Выявленная нами явная зависимость уровня ДНК-азной активности Ig от вида микроорганизма, вызвавшего патологический процесс, полностью согласуется с идиотип-антиидиотипической гипотезой образования абзимов, т. к. этот вид активности встречается почти у всех штаммов золотистого стафилококка и у большинства грамотрицательных палочек и почти не встречается у прочей кокковой микрофлоры. Отсутствие четкой связи уровня БАПНА-амидазной активности Ig с видом микроорганизма, высеянного из патологического очага, можно объяснить широким распространением протеолитической активности у микроорганизмов, в том числе и сапрофитной флоры.
Повышенный уровень абзимной активности является косвенным признаком увеличения синтеза антиидиотипических антител вообще (антигенная стимуляция микробными ферментами постоянно происходит и у здоровых лиц за счет проникновения через барьеры и разрушения сапрофитной микрофлоры). Учитывая, что по главенствующим сейчас представлениям данные антитела оказывают в большей степени супрессорное действие на синтез антител 1-го порядка и иммунных Т-лимфоцитов, можно предполагать, что у лиц с распространенными гнойно-септическими заболеваниями имеются нарушения в регуляции клеточного и гуморального иммунитета, что, возможно, и явилось собственно причиной возникновения гнойного процесса, а возникшее параллельно повышение уровня ферментной активности антител явилось как бы лишь маркером возникшего сбоя в системе иммунитета.
По результатам нашей работы можно сделать следующие выводы: 1. У больных хирургического профиля с гнойновоспалительными процессами наблюдается повышенный уровень ДНК-азной и БАПНА-амидазной активности иммуноглобулинов.
2. Частота встречаемости больных с достоверно положительной ДНК-азной активностью иммуноглобулинов была достоверно выше в группе лиц, патологический процесс у которых был вызван золотистым стафилококком (наличие ДНК-азной активности является его видовым признаком), что свидетельствует о зависимости уровня абзимной активности от вида микроорганизма, вызвавшего воспалительный процесс.
Иммунопатология, аллергология, инфектология, N2-2001, с.97-103.
1. Окулич В.К., Косинец А.Н., Москалев К.В., Сенькович С. А. Ферментная активность IgG у больных хирургической инфекцией. Иммунопатология, аллергология, инфектология. 1999; N1: 111-4.
2. Щуров Д. В. Каталитические антитела (обзор). Молекулярная биология 1997; 1: 5-15
3. Shuster A.M., Gololobov G.V., Kvashuk O.A. DNA hydrolyzing autoantibodies. Sciense 1992; 256: 665-7.
4. Leatherbarrow R.J. Designer catalytic antibodies. Nature 1989; 338: 206-7.
5. Иммунология. Под ред У. Пола. М.; 1988: 2.
6. Monroe J.G., Green M.I. Anti-idiotypic antibodyes and disease. Immunol. Invest 1986; 15: 263-86.
7. Азаренок К.С., Генералов И.И., Доценко Э.А. Иммуноглобулины класса G с гиалуронидазной активностью и возможные механизмы их образования. Иммунология 1989; 2: 15-17.
8. Барановский А.Г., Матушин В.Г., Власов А.В. и др. ДНК- и РНК-гидролизующие антитела из крови пациентов с различными формами вирусных гепатитов. Биохимия 1997; 12: 1358-66.
9. Генералов И.И., Шур И.И., Железняк Н.В. ДНК-азная активность иммуноглобулинов. Реферативный журнал. Иммунология. Аллергология. Деп. в ВИНИТИ 14.07.92, N2290: В92.
10. Жильцов И.В., Генералов И.И., Доценко М.Л. Ферментативная активность препаратов IgG у больных вирусными гепатитами. Проблемы современной медицины и фармации. Витебск; 1998; 1: 109.
11 . Paul S. Natural catalytic antibodies. Mol.Biotechnol 1996; 5: 197-207.
12. Stephens D.B., Thomas R.E., Stanton J.F., Iverson B.L. Polyclonal antibody catalytic variability. Biochem J. 1998; 332: 127-34.
13. Sun M., Gao Q.S., Li L. Proteolytic activity of an antibody light chain. J. Immunol. - 1994; 153: 5121-6. 14. Schultz P.G., Lerner R.A. Science 1995; 269: 1835.
15. Сидорская Е.В. Определение ДНК-азной активности иммуноглобулинов G как критерий иммунологической диагностики заболеваний щитовидной железы. Фундаментальные и клинические аспекты медицины и фармации. Тезисы докладов Студенческая медицинская наука XXI века; 1999; 91. 16. Иммунологические методы: Пер. с нем. Под ред. Г. Фримеля. М.: 1987 17. Шишкин С.С. Использование связывания красителей для количественного определения содержания белка в растворах (обзор). Вопросы медхимии 1982; 5: 134-41.
18. Erlanger B.F., Kokowsky N., Cohen W. The preparation and properties of two new chromogenic substrates of trypsin. Arch. Biochem. Biophys 1961; 95: 271-6.
19. Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование (практическое пособие). М.; 1981.
20. Москалев К.В., Конорев М.Р., Азаренок К.С. Гидролиз бензоиларгинин-p-нитроанилида поликлональными антителами Реферативный журнал. Иммунология. Аллергология 1990; 12: 44.
21. Пат.1066 РБ, МСI С12Q 1/34, C12N 9/22. Способ определения ДНК-азной активности. / Конорев М .Р., Азаренок К.С., Генералов И.И., Голубева А.Г. (РБ). N 243 А; 06.04.93.; опубл. 14.08.96.
22. Колб В.Г., Камышников В.С. Справочник по клинической химии.- Беларусь; 1982.
Написать комментарий
|
