Е. Г. Бочкарев

Институт аллергологии и клинической иммунологии, Москва

В начало...

Доставка биоматериала в ПЦР-лабораторию производится в холодовом термоконтейнере или термосе со льдом. Важной отличительной особенностью ПЦР-диагностики является относительно низкая стоимость оборудования для проведения анализа, сочетающаяся с универсальностью метода, что позволяет выявлять весь спектр клинически актуальных инфекционных агентов.

1 . Острая фаза заболевания.

2. Хроническая фаза заболевания.

3. Установление этиологии хронического инфекционного процесса урогенитального тракта.

4. Беременность с отягощенным акушерским анамнезом.

5. Бесплодие неясного генеза.

6. Контроль эффективности проведенного антибактериального лечения. В случае выявления фрагмента ДНК хламидии трахоматис после курса химиотерапии следует провести культуральную диагностику для исключения "ложноположительного с клинической точки зрения результата". Если проведение культуральной диагностики невозможно, то необходимо через 5-6 недель (полное обновление эпителиального покрова мочеполовых путей) провести повторное исследование методом ПЦР.

7. Выявление хламидий у ВИЧ-инфицированных лиц, больных туберкулезом, вирусным гепатитом и со вторичными иммунодефицитными состояними (онкологические больные после курсов химио- и лучевой терапии, трансплантации костного мозга, получающие иммуносупрессивную терапию).

Ниже приведены данные по выявлению хламидии трахоматис различными методами исследования. Использованы выборки из исследований, в которых хотя бы одним из методов они были бы обнаружены. Видно преимущество ПЦР как при исследовании первичных материалов (таблица 2), так и при детекции ДНК хламидий в клеточной культуре, зараженной клиническим материалом (таблица 3). В таблице 4 приведены данные о недостатках и достоинствах этих методов [7].

Таблица 2. Сравнительная чувствительность прямых методов исследования (ПИФ, ПЦР, ИФА) при выявлении С.trachomatis в клинических образцах
Методы детекции	Выявление хламидий (в %) в одних и тех же пробах
ПИФ	68,9
ПЦР	94,8
ИФА	25,62

Таблица 3. Сравнительная чувствительность прямых методов исследования (ПИФ, ПЦР) при выявлении C.trachomatis в клеточной культуре, зараженной клиническим материалом
Методы детекции	Выявление хламидий (в %) в одних и тех же пробах
ПИФ	94
ПЦР	96,2

Таблица 4. Достоинства и недостатки различных методов обнаружения Chlamydia trachomatis
Хар-ка метода	ПИФ	Культ. посев	ИФА-методы	ПЦР
Исследуемый материал	Любой	Большинство	Ограничения из-за неспецифичности реакций	Любой
Значение правильно взятых проб	Решающее	Решающее	Решающее	Решающее
Условия транспортировки проб	Если препарат фиксирован - условия не важны	Быстрая доставка или хранение при низкой температуре	Не имеет значения, если проба взята в буфер	Менее важны, чем для культуры клеток
Условия хранения	На короткое время при +40, длительно при -200 С	+40 С - сутки-двое, длительное хранение в жидком азоте	3-5 дней при +40С. Замораживание снижает чувствительность	На короткое время +40С, две недели - 200С, длительное время - в жидком азоте
Проверка адекватности взятия материала	Мазки оценивают во время тестирования	Не практикуется	Не практикуется	Определяется, присутствует ли ДНК
Потребность в специальном оборудовании	Люминесцентный микроскоп	Центрифуга	Комплект для ИФА	Амплификатор и оборудование для электрофореза
Обработка проб	Простая	Трудоемкая	Становится проще для новых тестов	Требует строгой предосторожности, чтобы не контаминировать ДНК
Чтение результатов	Субъективное и утомительное	Субъективное, умеренно утомительное	Объективное, простое	Объективное, простое
Время выполнения	30 минут	12-72 часа	3 часа	4,5-5 часов
Cпособы проверки результатов	Повторный просмотр	Повторный просмотр	Повторение теста	Повторная проба или переваривание эндонуклеазой
Зависимость результатов от	Опыта микроскописта	Чувствительности клеточной культуры	Присущей мощности теста	Хорошего контроля и отсутствия контаминации
Способность к поддержанию штамма	Нет	Да	Нет	Нет
Использование как контроля эффективности лечения	Ограничено	Рекомендуется	Ограничено	Рекомендуется с ограничениями

Изменения иммунного статуса при хламидийной инфекции. Изменения иммунной системы при острых поражениях нижнего отдела урогенитального тракта (уретрит, цервицит), как правило, неотчетливы. При хронизации и распространении процесса (сальпингит, простатит, артриты) они приобретают стойкий характер.

У больных хламидийной инфекцией отмечается снижение уровня нейтрофилов и повышение содержания эозинофилов. При исследовании клеточного звена иммунитета непрямым иммунофлюоресцентным методом с помощью моноклональных антител, определении концентрации Ig G, A, M методом радиальной иммунодиффузии могут выявляться следующие нарушения: в гуморальном звене - снижение Ig G и IgA при снижении относительного содержания клеток СD 72 (В-лимфоцитов). Дисбаланс клеточного звена иммунитета выражается в достоверном снижении клеток СD4 (относительное содержание), тенденции к повышению СD8, очевидно, за счет роста цитотоксических клеток и, как следствие, снижение иммунорегуляторного индекса. Факторы неспецифического иммунитета характеризуются значительным повышением относительного содержания популяции естественных киллеров, а также недостаточной функциональной активностью опсоно-фагоцитарной системы [13].

Заключение

Клиническая картина хламидийного инфекционного процесса характеризуется скрытным течением и малосимптомностью. Хламидиоз имеет тенденцию к хронизации и характеризуется появлением таких осложнений, как бесплодие, невынашивание беременности, экстрагенитальные поражения. Хламидии часто встречаются в ассоциации с другими возбудителями мочеполовых инфекций, такими, как, микоплазмы, уреаплазмы, гонококки, трихомонады. В диагностике хламидийного инфекционного процесса первостепенное значение имеют лабораторные методы, позволяющие установить этиологический диагноз.

В настоящей работе изложены современные лабораторные методы выявления хламидийной инфекции. Предел чувствительности и специфичности каждого метода учитывают при оценке показаний для их использования. Одно хламидийное включение, выявляемое культуральным методом, соответствует 600 копиям ДНК и 87 иммунофлюоресцирующим частицам. Считается, что изоляция возбудителя в клеточной культуре, так же, как и определение антигенов с помощью иммунофлюоресцентного и иммуноферментного анализа, происходит лишь в 60-70% случаев положительных по молекулярно-биологическим данным (полимеразная цепная реакция и лигазная цепная реакция).

Недостатком молекулярно-биологических методов является высокая вероятность контаминации ДНК, в результате чего возможно появление ложноположительных результатов. Возможны также ложноотрицательные результаты из-за присутствия в пробах различных ингибиторов ПЦР и ЛЦР.

В настоящее время не существует лабораторного метода, позволяющего избежать как ложноположительных, так и ложноотрицательных результатов. При диагностике хламидиоза необходима комплексная лабораторная диагностика (ПИФ, ИФА, культуральный метод, ПЦР, выявление титров антител к антигенам возбудителя), позволяющая выявить возбудителя, определить стадию заболевания, обосновать необходимость назначения антибактериальных препаратов. Изучение иммунного статуса и обоснованное применение иммуномодуляторов позволит повысить эффективность лечения в отдаленные после заражения сроки.

Литература

1. Башмакова М.А., Бочкарев Е.Г., Говорун В.М., Савичева А.М., Парфенова Т.М. // Хламидиоз. Современные подходы к диагностике и лечению.- М., 1999.-61 с.

2. Козлова В.И., Пухнер А.Ф. // Вирусные, хламидийные и микоплазменные заболевания гениталий. -М.: ИИД "Филинъ".-1997.-536 с.

3. Поздеев О.К., Покровский В.И. Внутриклеточные паразиты: бактерии семейства Chlamydiae, Rickettsiacea и Bartonellaceae// Медицинская микробиология.- М.,: Гэотар Медицина. - 1999.- с.529-551.

4. Cавичева А.М., Башмакова М.А., Шипицина Е.В., Шалепо К.В., Мартикайнен З.М., Зациорская С.Л., Рыбина Е.В., Новикова Л.Н., Тараскина А.Е. Клиническая оценка генитальных инфекций // Полимеразная цепная реакция в диагностике и контроле лечения инфекционных заболеваний. Материалы 3-ой Всероссийской научно-практической конференции.- М.- 2000.- с.79-82 .

5. Савичева А.М. Урогенитальный хламидиоз и репродуктивное здоровье женщин.// Тез. докл. VII Рес. Съезда дерматологов-венерологов. Казань.- 1996.-ч.3.-с.121.

6. Савичева А.М. Хламидиоз - болезнь молодых. // Материнство.-1996.-N2.-с.14-16.

7. Савичева А.М., Башмакова М.А. Урогенитальный хламидиоз у женщин и его последствия. Под ред. Айламазяна Э.К. - Н.Новогород: Издательство НГМА.- 1998.- 182 с.: ил.

8. Серов В.Н., Краснопольский В.И., Делекторский В.В. и др. Хламидиоз. Клиника, диагностика, лечение. Методические рекомендации.- М.- 1997 г.-23 с.

9. Alaniz Sanchez A. Chl. trachomatis and displasia cervical.// Ginecol. Obsterrics.-1995.-Sep.-vol.63.-p.377-381.

10. Dwyer R.St.C. Chlamydial infection. Results of micro-immunofluorescence tests for the detection of type-specific antibody in certain chlamydial infections // Brit. J. Vener. Dis. - 1972. - Vol. 48. - P. 452-459.

11 . Everett K.D.E. Emended description of the order Chlamydiales, proposal of Parachlamydiaceae fam. nov. and Simkaniaceae fam. nov., each containing one mono-typic genus, revised taxonomy of the family Chlamydiaceae, including a new genus and five new species, and standards for the identification of organisms // Inter. J. Syst. Bacterial.-1999. - Vol. 49. - P. 415-440.

12. Ridgway G.L. // FEMS workshop human chlamydial infections.-Program de Bildiri ozelteri.-Izmir.-1997.-p.38-44.

13. Stephens R.S. Chlamydia. Intracellular Biology, Pathogenesis, and Immunity. -// Washington: ASM Press, 1 999. - P. 143-146.