Документ взят из кэша поисковой машины. Адрес оригинального документа : http://www.enzyme.chem.msu.ru/eduproc/prac/task9/part10.doc Дата изменения: Fri Feb 13 21:23:14 2004 Дата индексирования: Mon Oct 1 23:25:17 2012 Кодировка: koi8-r

Глава 10 Перенос энергии


Флуоресцентный перенос энергии - это перенос энергии возбужденного
состояния от донора d к акцептору а. Он происходит без промежуточного
испускания фотонов и является в основном результатом диполь-дипольных
взаимодействий между донором и акцептором. Скорость переноса энергии
зависит от степени перекрывания спектра испускания донора со спектром
поглощения акцептора, относительной ориентации дипольных моментов переходов
и расстояния между молекулами. Именно эта зависимость от расстояния
привела к широкому использованию переноса энергии для измерения расстояний
между донорами и акцепторами. Для таких измерений необходимо, чтобы пара d
-а была разделена расстоянием, которое не изменялось бы за время жизни
возбужденного состояния донора. В дополнение к этому мы также рассмотрим
применение переноса энергии для определения распределения расстояний между
парами d - а, скорости взаимной диффузии d и а и расстояния максимального
сближения. Зависимость флуоресцентного переноса энергии от всех
перечисленных факторов обеспечивает значительные возможности использования
метода для биохимических исследований.
В этой главе будет рассмотрен безызлучательный перенос, который
происходит в результате диполь-дипольного взаимодействия между донором и
акцептором и не является простым испусканием и перепоглощением фотонов.
Последнее - излучательный перенос, зависящий от менее интересных оптических
свойств образца, таких, как размер кюветы с образцом, оптические плотности
образца на длинах волн возбуждения и флуоресценции и точная геометрия
пучков возбуждающего и испускаемого света. В противоположность этим
тривиальным факторам безызлучательный перенос энергии содержит богатую
информацию касающуюся подробностей строения молекул донорно-акцепторных
пар. Константа скорости переноса энергии от специфического донора к
специфическому акцептору kТ определяется выражением
[pic] (10.1)
где тd - время жизни возбужденного состояния донора в отсутствие
акцептора; r - расстояние между донором и акцептором; R0 -
характеристическое расстояние, называемое фёрстеровским радиусом, при
котором эффективность переноса составляет 50% [1]. Такая зависимость
скорости переноса от расстояния привела к многочисленным применениям
переноса энергии в биохимических исследованиях, в особенности потому, что
фёрстеровский радиус находится в пределах 20 - 50 ?. Этот диапазон
расстояний сравним с диаметром большинства белков и толщиной биологических
мембран. Любые явления, которые оказывают влияние на расстояние d - а,
будут влиять на скорость переноса энергии, что позволяет их количественно
охарактеризовать. Например, измерение переноса энергии было использовано
для оценки расстояния между связывающими центрами белков, расстояния между
хромофорными группами белков и другими, связанными с мембранами
хромофорами, латеральной ассоциации мембранных компонентов, реакций
ассоциации между макромолекулами. В этих приложениях используется степень
переноса энергии между фиксированными донорами и акцепторами для
установления расстояния между ними [2,3].
Новое и в равной степени интересное приложение метода переноса энергии
- определение статических и динамических конформационных свойств
макромолекул в растворе [ 4]. При детальном анализе кинетики затухания
флуоресценции донора можно в принципе определить распределение расстояний
. между парами d - а и скорость, с которой донор и акцептор диффундируют
относительно друг друга. С помощью таких измерений можно было бы
выявлять детали структурной гетерогенности макромолекул и структурные
флуктуации этих молекул на сравнительно больших расстояниях (~ 40 ?). В
настоящее время подобный детальный анализ требует тщательной оценки как при
получении, так и при интерпретации спектральных данных. Тем не менее
выявленные возможности метода переноса энергии скорее всего приведут к
непрерывному развитию необходимых методов.
В заключение будет рассмотрен перенос энергии в предельном случае
быстрой диффузии. В этом случае не имеют значения ни пространственное
распределение донора и акцептора, ни их скорости диффузии. Эффективность
переноса энергии ограничивается только расстоянием максимально возможного
сближения между донором и акцептором. Это явление может быть использовано
для определения глубины залегания хромофоров в мембранах или белках по
отношению к поверхности раздела макромолекула/вода.
Следует отметить, что изучение переноса энергии дает молекулярную
информацию, отличающуюся от той, которая может быть получена из релаксации
растворителя, реакций в возбужденном состоянии, тушения и поляризации
флуоресценции. Все перечисленные спектральные свойства флуорофоров
характеризуют в первую очередь их взаимодействие с другими молекулами в
окружающей сольватной оболочке. За исключением влияния на спектральные
свойства донора и акцептора, эти взаимодействия менее важны для переноса
энергии. Безызлучательный перенос энергии эффективен на расстояниях до 50
?. Находящийся в этом промежутке растворитель или макромолекула слабо
влияют на эффективность переноса энергии, которая главным образом зависит
от расстояния d - а. В следующем разделе изложена простейшая теория
безызлучатель-ного переноса энергии и обсуждены те факторы, которые
ограничивают ее использование. Эта теория приложима к парам d - а,
находящимся на фиксированном расстоянии. Для анализа других часто
встречающихся ситуаций необходимо более сложное математическое описание.
Для иллюстрации широких возможностей метода переноса энергии будут
приведены типичные примеры.
10.1. Теория переноса энергии для донорно-акцепторных пар
Рассмотрим донор и акцептор, находящиеся на фиксированном
расстоянии r. Константа скорости переноса энергии от d к а определяется
выра-жением
[pic] (10.2),(10.3)

где фd - квантовый выход донора в отсутствие акцептора; n - показатель
преломления среды; N - число Авогадро; г - расстояние между донором и
акцептором; тd - время жизни возбужденного состояния донора в отсутствие
акцептора; Fd (v) - нормированная интенсивность флуоресценции донора в
шкале волновых чисел в диапазоне от v до v+?v, причем суммарная
интенсивность принимается равной единице; ?а(v) - коэффициент экстинкции
акцептора, соответствующий волновому числу v; ?d(=фd/?d) - константа
скорости испускания донора; к2 - фактор, описывающий взаимную ориентацию в
пространстве дипольных моментов переходов донора и акцептора (рис. 10.1).
Интеграл перекрывания J, отражающий степень спектрального перекрывания
между испусканием донора и поглощением акцептора, может быть записан в
другой форме в шкале длин волн (?):
[pic] (10.4)
Его размерность М-1 . см3. Fd(?) - безразмерная величина. Размерность
?a (?) - М-1 см-1. Постоянные члены в уравнении (10.2) обычно объединяют
для определения фёрстеровского радиуса R0 как расстояния, на котором
константа скорости переноса энергии kТ равна константе скорости затухания
флуоресценции донора в отсутствие акцептора (Гd = ? d-1 ). На этом
расстоянии половина молекул донора дезактивируется за счет переноса
энергии, а половина - по обычным излучательным или безызлучательным
механизмам. Из уравнения (10.2) и kТ = тd-1 получаем
[pic] (10.5)
Используя определение R0 и уравнение (10.2), легко показать, что
константа скорости переноса энергии определяется простым выражением:
[pic] (10.6)
Постоянные члены в уравнении (10.5) могут быть объединены:

[pic] (10.7)
[pic] (10.8)
Часто измеряют эффективность переноса энергии Е, которая определяется
как отношение числа поглощенных донором фотонов к числу фотонов,
перенесенных на акцептор:
[pic] (10.9)
Эффективность переноса энергии часто вычисляют, исходя из
относительного квантового выхода флуоресценции в присутствии (Fda) и в
отсутствие (Fd) акцептора или времен затухания в этих же условиях (?da, и
?d соответственно):
[pic] (10.10)
Уравнение (10.10) можно получить из (10.9), если учесть
[pic](10.11)
Уравнение (10.11) можно вывести, если принять во внимание, что Fda/Fd
= = Гd/(Гd + kТ). Эффективность переноса энергии можно непосредственно
связать с расстоянием:
[pic] (10.12)
Это уравнение получается при подстановке (10.6) в (10.9).
Важно осознать, что предположения, использованные при выводе этих
уравнений, применимы только к донорно-акцепторным парам, разделенным
фиксированным расстоянием. Эта ситуация часто встречается для маркированных
белков, но фиксированных донорно-акцепторных расстояний, как правило, не
бывает ни для смеси донора и акцептора в растворе, ни для доноров и
акцепторов, равномерно распределенных в мембране. В этих случаях
необходимы более сложные выражения, и их, как правило, выводят путем
усреднения константы скорости переноса в соответствии с предполагаемым
пространственным распределением донорно-акцепторных пар. Далее,
фиксированные расстояния d -а приводят к единственной скорости переноса,
и, как следствие, кинетика затухания интенсивности флуоресценции должна
быть одноэкспоненпиальной. Одноэкспоненциальные кинетики затухания
флуоресценции донора не ожидаются и не наблюдаются для случаев, когда
расстояние d -а не является фиксированным (разд. 10.6).
Если считать модель с единственным расстоянием d - а приемлемой, то
легко заметить, что скорость переноса энергии зависит от расстояния R0 ,
которое в свою очередь определяется величинами к, n, ?d и J , которые
должны быть известны для вычисления расстояния. Показатель преломления
обычно известен из состава растворителя, ?d определяют путем сравнения со
стандартными соединениями, а интеграл перекрывания для пары d -а должен
быть вычислен. Чем больше интеграл перекрывания спектра испускания донора
со спектром поглощения акцептора, тем больше значение R0 . Акцепторы с
большим коэффициентом экстинкции приводят к большим значениям R0. Важно
отметить, что в уравнениях, приведенных выше, предполагается, что при
связывании с акцептором время затухания флуоресценции донора не изменяется
по каким-либо иным причинам кроме безызлучательного переноса энергии. Для
маркированных макромолекул это не всегда может быть так. Аллостерические
взаимодействия между центрами связывания донора и акцептора могут изменить
время затухания для донора за счет или усиления других процессов затухания,
или, наоборот, предотвращения этих процессов [6]. В таких случаях необходим
более сложный анализ кажущейся эффективности переноса (разд. 10.7).
Зависимость R0 от спектрального перекрывания иллюстрируется рис. 10.2,
на котором представлены данные для переноса энергии от изомеров
маркированного дансилом фосфатидилэтаноламина (DPE) к маркированному
эозином липиду (ЕРЕ). Все изомеры DPE обладают разными спектрами испускания
[7] Чем больше спектр изомеров DPE сдвинут в длинноволновую область, тем
сильнее перекрывание со спектром поглощения ЕРЕ и тем больше значение
Rо(табл. 10.1). Видно, что R0 не сильно зависит от J . Это происходит из-за
зависимости от корня шестой степени в уравнении (10.7).
Важным в анализе эффективности переноса энергии является ориента-
ционный фактор к2 , который определяется выражением
[pic] (10.13)
где ?т, - угол между диполем испускания донора и диполем поглощения
акцептора; ?d и ?a - углы между этими диполями и вектором, соединяющим
донор и акцептор (рис. 10.1).
[pic]
РИС. 10.1. Диполи донора и акцептора, находящиеся на фиксированном
расстоянии r.

В зависимости от взаимной ориентации донора и акцептора этот фактор может
изменяться от 0 до 4. Для направленных в одну сторону и параллельных
диполей переходов к2 = 4, для противоположно направленных и параллельных
диполей к2 = 1. Так как для вычисления расстояния берется корень шестой
степени, то изменение к2 от 1 до 4 приводит к погрешности в определении к
всего лишь 26%. Однако если диполи ориентированы перпендикулярно один к
другому, то к2 = 0, что может привести к серьезным ошибкам при вычислении
расстояния. Эта проблема подробно обсуждается в работах [8, 9]. Измеряя
анизотропию флуоресценции донора и акцептора, можно установить пределы
изменения к2 и, таким образом, минимизировать неопределенность в вычислении
расстояния. Вообще неопределенность в значении к2 , по-видимому, не
приводит к большой погрешности в вычислении расстояний. Обычно принимают к2
= 2/3, что соответствует беспорядочной ориентации доноров и акцепторов за
счет вращательной диффузии до переноса энергии.

[pic]
РИС. 10.2. Спектры возбуждения и испускания флуоресценции
маркированных дансилом и эозином липидов [7]. 1 - испускание; 2 -
возбуждение, Дансилом и эозином маркированы производные
фосфатидилэтаноламина. Числа соответствуют расположению диэтил-аминовой и
сульфонильной групп в нафталиновом кольце. Коэффициент эк-стинкции ЕРЕ
равен 85000 М-1. см-1 при 527 НМ. (С разрешения American Chemical Society.)


Таблица 10.1. Вычисленные значения R0 [7]
[pic]
a Маркированный дансилом фосфатидилэтаноламин.
б Маркированный эозином фосфатидилэтаноламин.
Это значение обычно и используют для вычисления R0 . Альтернативно
можно принять, что имеется диапазон статических ориентации донора и
акцептора, не изменяющихся за время жизни возбужденного состояния. В этом
случае к2 = 0,476 [ 3]. Для флуорофоров, связанных с макромолекулами,
сегментальные движения донора и акцептора могут разупорядочивать
ориентацию. Более того, если поляризация донора и акцептора мала (< 0,3),
то погрешность в расстоянии, вероятно, будет менее 10% [10].
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ПОДТВЕРЖДЕНИЕ ЗАВИСИМОСТИ ПЕРЕНОСА ЭНЕРГИИ ОТ r6.
Согласно теории безызлучательного диполь-дипольного переноса энергии, для
фиксированных расстояний между донором и акцептором эффективность переноса
энергии зависит от r6, где г - расстояние между молекулами донора и
акцептора. Предсказанная зависимость от расстояния была подтверждена
экспериментально, и полученные результаты иллюстрируют интерпретацию данных
по переносу энергии. В работах [ 11] и [12] изучены олигомеры поли-L-
пролина, маркированного по противоположным концам нафтилом (донор) и
дансилом (акцептор) (рис. 10.3). Число пролиновых остатков (п) между этими
флуорофорами варьировалось от 1 до 12. Поли-L-пролин образует жесткую
спираль с известными атомными размерами, что обеспечивает фиксированное
расстояние между донорными и акцепторными участками в диапазоне от 12 ? (n
= 1) до 46 ? (n = 12).
Спектры возбуждения этих производных приведены на рис. 10.4.
Эффективность переноса энергии определяли по проявлению флуоресценции
акцептора при возбуждении донора. Дансил-L-пролилгидразид не содержит
донора, и, следовательно, его спектр возбуждения принимается за спектр,
соответствующий 0% переноса. При любой данной длине волны об эффективности
переноса энергии Е можно судить по амплитуде спектра возбуждения акцептора
а в соответствии с А = ?a + E?d, где ?a и ?d , - коэффициенты экстинкции
акцептоpa и донора соответственно.

[pic]
РИС. 10.3. Структура дансил(L-пропил)n-?-нафтила, использованного для
изучения переноса энергии [11].
[pic]
РИС. 10.4. Спектр возбуждения дансил-пролиповых молекул.
1 - дансил-L-пролил-а-нафтил, 100% переноса; 2- дансил(L-пролип)n- ?
-нафтил (п =5, 7, 8, 10 и 12); 3 - дансил-L-пролилгидразид, 0% переноса.

Для дансил-L-пролил-?-нафтила, в котором донор и акцептор расположены
близко, эффективность переноса энергии составляет 100%. Для этой донорно-
акцепторной пары наибольшая чувствительность спектра возбуждения к переносу
энергии наблюдается при 290 нм - максимуме поглощения нафтилового донора.
Для других производных эффективность переноса имеет промежуточное значение
и зависит от длины прокладки из L-пролина. Эффективность переноса энергии
определенно уменьшается с увеличением длины прокладки.
[pic]
РИС. 10.5. Зависимость эффективности переноса энергии в дансил(L-пропип)-a-
нафтипе от расстояния (n = 1 - 12).

Целью этих экспериментов было определение зависимости безызлучателъ-
ного переноса энергии от расстояния. Следовательно, было принято, что
эффективность переноса энергии зависит от расстояния в соответствии с
уравнением
[pic] (10.14)
где R0 и r имеют их обычный смысл, а j - показатель степени,
который необходимо определить из наблюдаемой зависимости Е от r.
Преобразование уравнения (10.14) дает
[pic] (10.15)
Следовательно, график зависимости lg(E -1- 1) от lg r имеет наклон j
(рис. 10.5). Наклон равен 5,9 ±0,3 [11, 12]. Из этого превосходного
соответствия с предсказываемым значением j = 6 авторы работ [11, 121
заключили, что перенос энергии описывается теорией Фёрстера. В этих
экспериментах поляризация акцептора, возбуждаемого за счет переноса
энергии, была равна нулю, даже когда она измерялась в застеклованном
растворителе. Это указывает на разупорядочивание поляризации в ходе
переноса энергии и корректность использования к2= 2/3. Важным аспектом
рассматриваемых экспериментов является наличие жесткой прокладки между
донором и акцептором. Если бы прокладки были гибкими, то существовало бы
распределение расстояний между донором и акцептором, что сильно усложнило
бы анализ. Более того, если бы прокладка не была жесткой, то расстояние
между парами донора и акцептора могло бы меняться в течение времени жизни
возбужденного состояния, что также могло бы привести к значительному
усложнению анализа данных. В разд. 10.4 будет показано, как такие
усложняющие обстоятельства могут быть учтены при использовании кинетики
затухания флуоресценции донора.
В работе [13] проверялась зависимость скорости переноса энергии в
первой степени от интеграла перекрывания. Эти эксперименты обсуждаются в
задаче 10-1 в конце главы.
10.2. Измерение расстояний методом переноса энергии
В предыдущем разделе была описана теория, пригодная в случае
фиксированного расстояния между донором и акцептором. Измерение скорости
переноса энергии позволяет вычислить расстояние между донором и акцептором
-метод, широко используемый в биохимических исследованиях. Превосходный
пример применения флуоресцентного переноса энергии для определения
расстояния между различными связывающими центрами белка можно найти в
работе [14]. При подходящих обстоятельствах по этим расстояниям можно
сделать вывод о форме белка и локализации связывающих центров. Был изучен
родопсин - фоторецепторный белок пластинчатых мембран в палочках сетчатки
глаза позвоночных. Хромофорной областью родопсина является 11-цис-ре-
тиналь. Хромофор (ретиналь) изомеризуется при поглощении света, и это
служит сигналом поглощения фотона. Максимум поглощения находится при 500
нм, т.е. в области, благоприятной для проявления ретиналем акцептирующих
свойств по отношению к большому числу флуорофоров.
[pic]
Родопсин маркировали в трех различных точках (А, Б и В) семью
различными флуорофорами (рис. 10.6). Каждый из этих флуорофоров может
дониро-вать энергию ретиналю с R , находящимся в диапазоне 33 - 51 А.
Эффективность переноса энергии измерялась и по относительным квантовым
выходам в отсутствие (Q b ) и в присутствии (Qd) акцептора, и по временам
затухания Tb и -td (присутствие акцептора указывается индексом d). Под
воздействием света ретиналь обесцвечивается (индекс b ), и исчезает его
полоса поглощения при 500 нм (рис. 10.7). Это благоприятное обстоятельство
позволяет измерять времена затухания и квантовые выходы в отсутствие
переноса энергии просто по обесцвечиванию акцептора. Вслед за
обесцвечиванием ретиналя времена затухания и квантовые выходы всех доноров
возросли (табл. 10.2). Была получена совершенно одинаковая эффективность
переноса и по временам затухания, и по измерению квантового выхода. Во всех
случаях эффективность была низкой, что для различных донорно-акцепторных
пар указывает на расстояния, больше чем R.
|[pic] |[pic] |


РИС. 10.7. а - перекрывание спектра испускания донора 1 со спектром
поглощения группы 11-цис-ретиналя родопсина.б- спектры испускания донора 7
до и после фотообесцвечивания поглощения ретиналя.


Как было описано ранее, если связывание жесткое, то относительная
ориентация донорно-акиепторных пар может влиять на значение к2 и,
следовательно, на вычисляемые значения расстояний г. В рассматриваемом
случае было использовано несколько разных доноров для каждого центра
связывания и получены приблизительно одинаковые расстояния для каждого
центра связывания и для каждого донора. Так как мало вероятно, чтобы
относительная ориентация диполей излучения каждого донора была одна и та
же, соответствие между индивидуальными измеренными расстояниями указывает
на то, что влияние фактора ориентации на вычисленные расстояния мало.
Одним из интересных выводов работы [14] является большое вычисленное
расстояние между центром А и областью ретиналя, которое составляет 75 А.
Если бы молекула родопсина была сферической, ее диаметр не превышал бы 40
- 45 А. Следовательно, расстояние 75 А между центром А и областью ретиналя
указывает на вытянутую структуру молекулы (рис. 10.8). Было также измерено
расстояние между центрами А, Б и В.

[pic]
Таблица 70.2. Характеристики переноса энергии на цис-рети-наль [14]
а Формулы соединений приведены на рис. 10.6.
б В предположении, что к = 2/3 и n = 1,4.

Измерения проводились на обесцвеченном родопсине, что позволило
избежать усложнений, связанных с переносом энергии на ретиналь. В этом
случае эффективность переноса между центрами составляла 90% или больше
(табл. 10.3). Полученные результаты говорят о том, что центры находятся
близко один от другого, но все три центра расположены вдали от области
ретиналя (рис. 10.8). Авторы работы [ 14] предположили, что три
маркированных центра находятся в гидрофильной части родопсина, а 11-цис-
ретиналь - в гидрофобной области, которая погружена в мембрану. Этот набор
экспериментальных данных иллюстрирует трудности и важные особенности
измерения расстояний, которые состоят в получении однородно маркированных
макромолекул с метками, находящимися в известных центрах связывания. Без
контроля процедуры маркирования вычисление расстояний может быть только
приблизительным.

[pic]
Таблица 70.3. Характеристики перекоса энергии между хромофорами в центрах
А, Б и В обесцвеченного родопсина [14]

[pic]
РИС. 10.8. Модель молекулы родопсина, базирующаяся на наблюдаемых
расстояниях между центрами.


10.3. Обнаружение реакций ассоциации макромолекул по переносу энергии
10.3.1. Ассоциация молекул АТРазы в пипидных везикулах
Во многих случаях полезная информация об ассоциации макромолекул может
быть получена методом переноса энергии, даже если эти данные не
используются для определения расстояния между молекулами донора и
акцептора. Так, авторы работы [15] использовали перенос энергии между
маркированными молекулами Мg2+-Са2+-АТРазы для того, чтобы определить,
находятся ли молекулы АТРазы в мембране в агрегированном состоянии.
Mg2+-Ca2+-ATPaзы из саркоплазматического ретикулума маркировалась
отдельно 5-[ 2-(иодацетил)аминоэтил-5-аминонафталин-1-сульфокислотой (1,5-
IAEDANS) и отдельно иодацетамидофлуоресцеином (IAF) (рис. 10.9). IAEDANS
является донором, a IAF - акцептором. Раздельно маркированные молекулы
АТРазы встраивались в разные фосфолипидные везикулы. В результате
смешивания раздельно встроенных молекул АТРазы было получено, что
спектр испускания представляет собой сумму спектров испускания раздельно
маркированных молекул. Следовательно, во временной шкале данного
эксперимента не происходит переноса энергии между IAEDANS и IAF. Это
указывает на медленный обмен молекулами АТРазы между раздельно
реконструированными везикулами. Однако если маркированные IAEDANS и IAF
молекулы АТРазы встраиваются в одни и те же липидные везикулы, то
флуоресценция IAEDANS частично тушится, а флуоресценция IAF усиливается
(рис. 10.9). Эти результаты согласуются с появлением переноса энергии между
молекулами донора и акцептора. Возможно, наблюдаемый перенос энергии может
быть вызван просто близким расположением маркированных молекул АТРазы при
встраивании в одни и те же везикулы. Или точно так же перенос энергии может
быть обусловлен латеральной диффузией мономеров АТРазы в плоскости
липидного бислоя. Эти возможности были проверены добавлением избытка липида
к разбавленному раствору АТРазы. Добавление липида, приводящее к 10-
кратному разбавлению АТРазы, не влияет на степень переноса энергии.
Наоборот, добавление 10-кратного избытка немаркированной АТРазы ликвидирует
перенос энергии. Оба наблюдения находятся в соответствии с образованием
агрегатов АТРазы в мембране.
Эти эксперименты иллюстрируют, каким образом метод переноса энергии
может быть использован для прямой проверки наличия ассоциации между
макромолекулами. Дальнейшая характеристика этой системы требует более
детальных экспериментов. Из приведенных данных нельзя сделать вывод,
образует ли АТРаза димер, тетрамер или другие агрегаты. Действительно, в
экспериментах не ставилась цель - выявить эти свойства. Степень
маркирования была различной - обстоятельство, которое может сильно
усложнить более тщательный анализ, но не влияющее на приведенные выше
выводы.

|[pic] |
|[pic] |


РИС . 10.9. Графическое представление переноса энергии между молекулами
АТРазы, маркированными IAEDANS и IAF [15].
а - спектр испускания раздельно реконструированных комплексов АТРаза -
липид; б - спектр испускания совместно реконструированных комплексов
АТРазы. Точками показана вычисленная сумма индивидуальных спектров.