Раздел практикума 'Практические задачи по генной инженерии'

Целью раздела Большого практикума 'Практические задачи по генной инженерии' является ознакомление студентов кафедры биохимии с основными методиками получения молекулярно-генетических конструкций и экспрессии рекомбинантных белков. В ходе этого раздела практикума студенты осваивают такие методы, как:

• выделение и спектрофотометрическое измерение концентрации ДНК и РНК,
• электрофорез нуклеиновых кислот в агарозном геле,
• обратная транскрипция,
• полимеразно-цепная реакция (ПЦР),

• трансформация клеткок E.coli плазмидной ДНК,
• точечный мутагенез,
• экспрессия рекомбинантных белков в прокариотической и эукариотической системах.

Поскольку данный раздел завершает большой практикум, в ходе выполнения задач студенты используют также широкий спектр освоенных на предыдущих разделах биохимических и иммунохимических методов, необходимых для детекции белковых молекул (электрофорез, иммуноблоттинг, иммуноферментный анализ, аффинная хроматография).

В процессе выполнения каждой индивидуальной задачи студенту предлагается получить молекулярно-генетическую конструкцию, кодирующую последовательность какого-либо рекомбинантного белка или его фрагмента и проверить их экспрессию в соответствующей системе. В некоторых случаях предполагается дальнейшее использование полученного рекомбинантного белка для решения таких задач, как получение антител, определение эпитопа антител (картирование), исследование распределения в бактериальной или эукариотической клетке, изучение его физико-химических свойств, и т.д.

Практические занятия сопровождаются курсом лекций по генной инженерии и семинарами, во время которых происходит обсуждение результатов. По окончании практикума каждый студент делает доклад по результатам своей работы.

Примеры задач, выполненных на практикуме в 2008 году:

1. Получение молекулярно-генетической конструкции для экспрессии рекомбинантных Fab фрагментов антител клона 19С7 в клетках E. coli
2. Модификация вектора для улучшенной экспрессии цистатина С человека в клетках E. coli
3. Оптимизация экспрессии белка proBNP в клетках E. coli
4. Картирование антител, специфичных к цистатину С, с помощью рекомбинантных фрагментов белка
5. Получение точечного мутанта малого белка теплового шока HspB8 методом мегапраймера.

версия для печати
Страница последний раз обновлялась 15.09.2010