Фюъѓьхэђ тчџђ шч ъ§јр яюшёъютющ ьрјшэћ. Рф№хё ю№шушэрыќэюую фюъѓьхэђр : http://rnp-group.genebee.msu.ru/pages/pdf/molbio2001.pdf
Фрђр шчьхэхэшџ: Mon Feb 18 16:25:42 2008
Фрђр шэфхъёш№ютрэшџ: Mon Oct 1 19:22:16 2012
Ъюфш№ютър: ISO8859-5

ѕљѓцєќѓ?њїд? е№љѓљй№?, 2001, ъуп 35, < 4, т. 1-11

њыЧ лн њыЧ лн
ќсє 576.85.48

№ёќ?цї№ц ћз?ё?здї№? ецѓєд S7 ћ ўњдйѕцї§љѕ 926-986/1219-1393 16S њїє - єѓ??цзљйљ ?§дјд ћељњє№ ѕдѓљђ ћќе?дћ§№х? јњљєдњ№љ§№?цћє№џ њ№ељћљѕ
? 2001 ,,. §.№. њттуiлм1, д.з. йуоу,лм1, ц.з. јвъ у,1, з.д. ћфл луму,2, љ.д. є ,,лму,3, §.ћ. њуквтъ,вмтнли1,4, ?. е ублыт4, д.ѕ. єуфРоу,1*
щныоШъвъ ѕутну,тну,,у ,,уты тъ,вмму,,у ымл,в тлъвъ лп. ѕ.з. ѓупумуту,, ѕутн,, њуттлfl, 119899 2№мтълъыъ щлблну-iлпл~втнуи Члуоу,,лл ѕутну,тну,,у ,,уты тъ,вмму,,у ымл,в тлъвъ лп. ѕ.з. ѓупумуту,, ѕутн,, њуттлfl, 119899 3Biology Departament, Universityof Virginia, Charlottesville, VA 22904-4775, USA 4Institute of Experimental Pathology and Molecular Neurobiology, ZMBE, University of Muenster, D-48149, Muenstre, Germany
јутъыфло , вн^л 16.01.2001 ,,.
1џлпл~втнли

ћЧу н Чнъв лоШмРi лЧутуп тутъулъ , фуъфмуп ,блпувитъ,лл лЧутупмРi Чвону, ( Чвону,) т њїє. елу,,вмвб лЧутуп fl,оflвътfl у~вмШ бъ ъмРп ф у^вттуп оfl новънл, ~ъу ъ вЧывъ ъу~муи в,,ыоfl^лл. ї ъфв нуу лм^лл тлмъвб Чвону, л њїє в,,ыоfl^лfl уф ввоflвътfl ,Ртуну тфв^лщл~мРпл оШъв мъл,мРпл ,блпувитъ,лflпл Чвону, олЧу т њїє, олЧу т туЧтъ,вммуи пњїє. §нлв њїє - Чвону,Рв ,блпувитъ,лfl fl,оflътfl н лъл~втнлпл оfl ф ун луъл~втнуи новънл л ф flпу ,олflъ м лмплны вв утъ. соfl щу пл у,млfl ^воШмуи н ълмР, уъ кви ф у^втт тЧу нл лЧутуп, ,кмР мв ъуоШну тъ ынъы мРв лттову,млfl, нуъу Рв лмъвмтл,му б,л,ътfl , футовмвв , впfl, му л б Чуън ъв пулмпл~втнлi фуiуу,. њЧуъ фут,flвм м~оШмупы ъфы лбы~вмлfl ,блпувитъ,лfl щ ,,пвмъ 16S њїє т Чвонуп S7 - но~в,Рп Чвонуп тЧу нл поуи тыЧ~тъл^Р ф ун луъл~втнлi лЧутуп. №бпв вмР нкылвтfl нумтъмъР лтту^л^лл оfl нупфовнту, ,ыi внупЧлммъмРi Чвону, S7 лб E. coli л T. thermophilus т щ ,,пвмъуп 3'-нум^в,у,,у упвм 16S њїє E. coli. љЧ Чвон S7 ф уfl,оflъ ,Ртуны њїє-т,flбР,ы нъл,мутъШ, мв мЧо,?ытfl мвв. јутнуоШны нн њїє, ън л Чвоун fl,оflътfl нумщу п^лумму оЧлоШмРпл пн упуовныопл, оfl ну внъму,,у уфлтмлfl њїє-Чвону,Рi ,блпувитъ,ли утуЧув ,млпмлв ъ вЧывътfl ывоflъШ лi щуолм,,ы. єо~в,Рв тоу,: њїє-Чвону,Рв ,блпувитъ,лfl, нумтъмъ лтту^л^лл, лЧутупмРи Чвоун S7, 16S њїє, Escherichia coli, Thermus thermophilus.

ззцсцї№ц сутъл,,мыъРв , футовмлв , ,,у щмътъл~втнлв ытфвiл вмъ,,вмутъ ынъы му,,у молб (њћд) фу т?лщ у,нв тъ ынъы Р 30S л 50S тыЧ~тъл^ Чнъв лоШмРi лЧутуп [1-3], 70S лЧутупР л вв щымн^лумоШмРi нупфовнту, т пњїє л ъњїє [4] ,Р,л,,ъ м фв ,Ри фом ^вол, т,flбммРв т въоШмРп лбы~вмлвп лмпл~втнлi ф у^втту,, , нуъу Рi ы~тъ,ывъ лЧутуп. є упв ^лно ъ мтоfl^лл, н ънлп ф у^вттп уъмутлътfl тЧу н лЧутупР, нуъу fl fl,оflвътfl у~вмШ бъ ъмРп ф у^вттуп оfl новънл л ф flпу т,flбм т лмплнуи вв утъ. соfl фумлпмлfl пвiмлбп
ј лмflъРв тун вмлfl. м. - мыновуъл. евоун S7: E. coli (EcoS7), T. thermophilus (TthS7), B. stearothermophilus (BstS7). ў ,,пвмъ D3LH 16S њїє: E. coli (Eco16S њїє), T. thermophilus (Tth16S њїє), B. stearothermophilus (Bst16S њїє). ѕоfl тыЧ~тъл^ лЧутуп T. thermophilus (Tth30S). *?о. фу~ъ: kopylov@rnp-group.genebee.msu.su

тЧу нл лЧутупР ,км мв ъуоШну тъ ынъы ,блпувитъ,ылi пн упуовныо л лi нупфовнту,, му л лбы~вмлв ъв пулмплнл лi ,блпувитъ,лfl. ?ъупы тфвнъы, , уъол~лв уъ тъ ынъы мРi Чуъ, ывоflъ поу ,млпмлfl. енъв лоШмfl лЧутуп ф втъ,оflвъ туЧуи у~вмШ тоукмРи лЧумыновуф уъвлмРи нупфовнт, тутъуflли лб 50 бол~мРi Чвону, мвЧуоШ?у,,у бпв л ъ вi њїє бпв пл унуоу 120, 1500 л 3000 м. љлм лб фуiуу, н лбы~вмл лЧутупР тутъулъ , ,Рfl,овмлл ,ъумупмутъл л пувол у,млл тъ ынъы Р уъвоШмРi упвму, лол кв уъвоШмРi щ ,,пвмъу, тыЧ~тъл^. є футовмлп уъмутflътfl нупфовнтР лмл,лыоШмРi Чвону, т щ ,,пвмъпл њїє. №пвмму ънлв Члм мРв ,блпувитъ,лfl уф ввоflъ фв ,Рв ъфР тЧу нл лЧутупР, , ъу , впfl нн тъ ынъы тууъ,вътъ,ыв,,у њїј , тутъ,в лЧутупР уъквъ ыкв нумв~мРи ф уынъ тЧу нл.
1

2

њттуiлм л .

љмлп лб ~въР вi утму,мРi овпвмъу, тъ ынъы Р поуи тыЧ~тъл^Р Чнъв лоШмРi лЧутуп fl,оflвътfl 3'-нум^в,уи упвм 16S њїє, утму,ы нуъу у,,у тутъ,оflвъ њїє-Чвону,Ри нупфовнт т лЧутупмРп Чвонуп S7. евоун S7 ф ун луъ л,,въ но~в,ы уоШ , Члу,,вмвбв лЧутуп. єн утму,муи тъ ынъы мРи нупфумвмъ поуи тыЧ~тъл^Р, S7 fl,оflвътfl умлп лб ,ыi Чвону, (н упв S4), нуъу Ри лмл^лл ывъ вв тЧу ны [5]. ј л ъуп ум т,flбР,вътfl т 3'-нум^в,Рп упвмуп 16S њїє л тълпыол ывъ ,блпувитъ,лв ы,,лi Чвону,, щу пл ыfl 3'-нум^в,уи лЧумыновуф уъвлмРи упвм. ј л уътыътъ,лл тлмъвб 16S њїє, нн Чвоун- вф втту , ум ыъу,,вмму в,,ыол ывъ т,уи тлмъвб, т,flбР,flтШ т туЧтъ,вммуи пъ л^ви, str пњїє, ~ъу лм,,лЧл ывъ вв ъ мтоfl^л [6]. ?ъуъ ф у^втт ф flпу т,flбм c лмплнуи утъ Чнъв лоШмуи новънл. S7 - ъу уъмутлъвоШму мвЧуоШ?уи Чвоун, тутъуflли ф лпв му лб 150 плмунлтоуъ. ўлоу,,вмвъл~втнув т ,мвмлв мвнуъу Рi фв ,л~мРi тъ ынъы S7 тув клътfl , Чуъi њпн л?мм т туъ . [7], єлпы Р т туъ . [8] л їуоов т туъ [9]. №мъв втмуи утуЧвммутъШ фв ,л~муи тъ ынъы Р S7 fl,оflвътfl , лЧвоШмутъШ N-нум^в,Рi футову,ъвоШмутъви. § вiпв мfl тъ ынъы S7 лб,втъм оfl ,ыi ъв пущлоШмРi Чвону, - TthS7 (Thermus thermophilus) [7] л BstS7 (Bacillus stearothermophilus) [8]. соfl ,Рflтмвмлfl щымн^лл уъвоШмРi плмунлтоуъ л овпвмъу, тъ ынъы Р Чвон , футовмлв , ,,у м~ъР ЧуъР фу мф ,овммупы пыъ,,вмвбы Чвон BstS7 in vitro [10] л EcoS7 in vivo [9]. зу , впfl ,Рфуомвмлfl мтъуflви ЧуъР фуfl,лолтШ ммРв њћд у тъ ынъы в ,Ртуну,,у бв?вмлfl поуи тыЧ~тъл^Р Чнъв лоШмРi лЧутуп T. thermophilus (Tth30S) [1], лб нуъу Рi пукму ,Р~овмлъШ л ф умолбл у,ъШ тъ ынъы ы 16S њїє-Чвону,у,,у нупфовнт оfl S7. цв б фу~в нмвп, ~ъу лпвмму м ъуъ ,уф ут (л ъуоШну м мв,,у) - нну, тъ ынъы нумв~му,,у ф уынъ њїє-Чвону,у,,у ,блпувитъ,лfl - въ уъ,въ ту, впвммув пувол у,млв тъ ынъы Р лЧутуп. №бы~вмлв ,блпувитъ,лfl лмл,лыоШму,,у Чвон S7 c 16S њїє утуЧвмму лмъв втму, футнуоШны уму уф ввоflвъ фв ,Ри ъф тЧу нл поуи тыЧ~тъл^Р лЧутуп. § ымутъШ , лбы~вмлл ънлi ,блпувитъ,ли т,flбм т ЧуоШ?лпл бпвпл 16S њїє, олм нуъу уи тутъ,оflвъ 1542 м. соfl въоШму,,у лбы~вмлfl ,блпувитъ,лfl S7 c 16S њїє, мф лпв , щлбл~втнлпл пвъупл - ?ѕњ л њћд, ъ вЧывътfl плмлплбл у,ъШ щ ,,пвмъ 16S њїє, тфутуЧмРи н тфв^лщл~втнупы ,блпувитъ,л т Чвонуп S7. ћ фупуШ пвъу iлпл~втнуи пулщлн^лл їуоов т туъ . [11, 12] н ълу,о ы~тъун т,flбР,млfl S7 м 16S њїє. свов^луммРи молб ы~тън т,flбР,млfl S7 м 16S њїє, ,РфуомвммРи е нл-ьлм,, т туъ . [13, 14], фуб,уоло тун ълъШ ыбм,впРи щ ,,пвмъ

16S њїє у туъмл м. љмну, лб т ,мвмлfl т ммРпл, фуоы~вммРпл , мтъуflви Чуъв, товывъ, ~ъу ф л вов^луммуп молбв лтфуоШбу,отfl поунъл,мРи Чвоун EcoS7. ју-,ллпупы, ъу бпв~млв тф ,вол,у л оfl вбыоШъъу,, фуоы~вммРi єлпы уи т туъ . [10]. їтъуflfl Чуъ фут,flвм м~оШмупы ъфы лбы~вмлfl ,блпувитъ,лfl щ ,,пвмъ 16S њїє т Чвонуп S7 - но~в,Рп Чвонуп тЧу нл поуи тыЧ~тъл^Р ф ун луъл~втнлi лЧутуп. №бпв вмР нкылвтfl нумтъмъР лтту^л^лл оfl нупфовнту, ,ыi внупЧлммъмРi Чвону, S7 лб E. coli л T. thermophilus т щ ,,пвмъуп 3'-нум^в,у,,у упвм 16S њїє E. coli. љЧ Чвон S7 ф уfl,оflъ ,Ртуны њїє-т,flбР,ы нъл,мутъШ, мв мЧо,?ытfl мвв. єн њїє, ън л Чвоун fl,оflътfl нумщу п^лумму оЧлоШмРпл пн упуовныопл, фуъупы оfl ну внъму,,у уфлтмлfl лi ,блпувитъ,лfl утуЧув ,млпмлв ъ вЧывътfl ывоflъШ лi щуолм,,ы. ќћѓљз№? ?єћјцњ№ѕцї§д јуоы~вмлв тыфв -ф уы^вмъ E. coli оfl лЧутупму,,у Чвон TthS7 н ъну ЧРоу уфлтму мвв [15]. йвм tthS7 (rpsG) фуоы~ол јхњ т фобплР Z14.2 [16], нуъу fl тув клъ щ ,,пвмъ str уфв ум T. thermophilus, ,но~fl ,,вм tthS7. №тфуоШбу,ол ф ипв Р, тув клв ы~тъун втъ лн^лл BamHI (фу~в нмыъу): GCGCGGATCCCCAACGGACGGAGAAGGGCAGAGGTC л CTTGTGGATCCGGCCCG. єоумл у,млв ,,вм tthS7 , фобплы pQE32 ф у,улол фу ы~тъны втъ лн^лл BamHI. њвнупЧлммъмы фобплы pQS12.212 ъ мтщу пл у,ол , ?ъпп E. coli M15, тув кли pREP4 т ,,вмуп lac- вф втту . ћъ ынъы ы ,тъ,нл ф у,в flол твн,вмл у,млвп. ћн лмлм,, нуоумли м тыфв -нтф вттл S7 ф у,улол тъм ъмРп овнъ ущу вбуп фу ѓппол. TthS7 ,Рвоflол лб тыфв -ф уы^вмъ E. тoli, нн уфлтму , ф уъунуоi щл пР QIAGEN [17] л ммви фыЧолн^лл [15] т мвЧуоШ?лпл лбпвмвмлflпл. § мтщу пл у,ммРи ?ъпп ,Р л,ол , т вв LB т мълЧлуълнпл. јутов утълквмлfl фоъу н новънп уЧ,оflол IPTG у 1пѕ, футов ~в,,у тытфвмбл лмныЧл у,ол вв 12 ~. єовънл туЧл ол ^вмъ лщы,,л у,млвп л ф упР,ол Чыщв уп д (20 пM § лт-HCl, pH 7.6, 4 пM MgAc2, 400 пM NH4Cl, 0.2 пM EDTA, 4 пM пв нфъуъмуо). љтун тъ,у flол , Чыщв в д т 6ѕ ,,ымллмуп л утъ,оflол м 2 ~ ф л 0Рћ. јутов ыовмлfl вЧ лт тыфв мъмъ ммутлол м Ni-NTA-,, убы (QIAGEN, йв пмлfl), ф упР,ол Чыщв уп д т 20 пM лплбуо, TthS7 ол у,ол Чыщв уп д т 1 ѕ лплбуоуп. евоун фв в,улол , Чыщв д т 6 ѕ пу~в,лмуи л овв , Чыщв д [18]. єум^вмъ^л Чвон уф ввоflол тъм ъмРп пвъууп е вщу . евоун i млол ф л - 70Рћ.
ѕљѓцєќѓ?њїд? е№љѓљй№? ъуп 35 < 4 2001

№ёќ?цї№ц ћз?ё?здї№? ецѓєд

3

ћыфв -ф уы^вмъ E. coli оfl лЧутупму,,у Чвон EcoS7 ЧРо фуоы~вм товылп уЧ буп. йвм ecoS7 (rpsG) фуоы~ол јхњ т фобплР pNO3070 [19], нуъу fl тув клъ щ ,,пвмъ str уфв ум E. coli, ,но~fl ,,вм ecoS7. №тфуоШбу,ол ф ипв Р CAGTGAATTCGTTATCTTTTAGGCGTTC л CACACATATGCCACGTCGTCGC (фу~в нмыъР ы~тънл оfl втъ лнъб EcoRI л NdeI, тууъ,вътъ,вмму). јутов уЧ Чуънл NdeI л EcoRI щ ,,пвмъ ол,,л у,ол , ,внъу pET28b+ (Novagene), тн РъРи фу ъвп кв ы~тънп втъ лн^лл, фу нумъ уоШ ф упуъу щ,, §7. јуоы~вммы внупЧлммъмы фобплы pTR-7e ъ мтщу пл у,ол , ?ъпп E. coli DH-10B (QIAGEN). ћъ ынъы ы ,тъ,нл ф у,вflол твн,вмл у,млвп. ћн лмлм,, нуоумли м тыфв -нтф вттл S7 ф у,улол тъм ъмРп овнъ ущу вбуп фу ѓппол. соfl ,Рвовмлfl Чвон фобплы pTR-7e ъ мтщу пл у,ол , ?ъпп E. coli BL21 gold (DE3) pLysE (Novagene), нтф вттл ыли њїє-фуолпв бы щ,, §7 фу нумъ уовп ф упуъу lacUV5. єовънл ,Р л,ол , т вв LB т мълЧлуълнпл, нтф вттл EcoS7 лмы^л у,ол уЧ,овмлвп IPTG у 1 пѕ. EcoS7 ,Рвоflол лб тыфв -ф уы^вмъ E. тoli, нн уфлтму , ф уъунуоi щл пР QIAGEN [17]. єовънл туЧл ол ^вмъ лщы,,л у,млвп, тытфвмл у,ол , 50 пM § лт-HCl, pH 8.0, 500 пM NaCl, тув квп олбу^лп. јутов лмныЧ^лл уЧ,оflол ,,ол^в лм у 10%, пв нфъуъмуо у 5 пM, PMSF у 0.5 пM л § лъум X-100 у 1%. јутов уЧЧуънл ыоШъ б,ынуп ъвоШ^ ,но~вмлfl тъ,уflол , Чыщв в т 8ѕ пу~в,лмуи, ммутлол м NiNTA-,, убы л футов ф упР,нл нум^вмъ ^л пу~в,лмР фумлкол у мыоfl. евоун ол у,ол ,, лвмъуп лплбуо 0-0.5 ѕ , Чыщв в 50 пM § лт-HCl, pH 7.5, 500 пM NaCl, 5% ,,ол^в лм, 1 пM пв нфъуъмуо, 0.5 пM PMSF, фв в,улол , Чыщв 20 пM HEPES-KOH, pH 7.5, 100 пM NaCl, 5% ,,ол^в лм, 0.2 пM лълуъ влъ, 0.5 пM PMSF. єум^вмъ ^л Чвон уф ввоflол тъм ъмРп пвъууп е вщу . евоун i млол ф л - 70Р. јв в нупфовнтууЧ бу,млвп Чвоун фв в,улол , Чыщв 20 пѕ § лт-HCl, pH 7.6, 4 пѕ MgAc2, 400 пѕ NH4Cl, 0.2 пѕ EDTA, 4 пѕ пв нфъуъмуо. јобпл pFD3LH тув ко сїє нуфл щ ,,пвмъ D3LH 3'-нум^в,у,,у упвм 16S њїє E. coli фу нумъ уовп ф упуъу щ,, §7 [13]. [32P]-пв~вмРи щ ,,пвмъ D3LH 16S њїє фуоы~ол ъ мтн лф^лви in vitro њїє-фуолпв буи щ,, §7 (MBI, "ўв пвмът", ѓлъ,) , ф лтыътъ,лл [32P]-UTP, нн уфлтму мвв [13, 20, 32], у~лол овнъ ущу вбуп , јддй , ф лтыътъ,лл 6ѕ пу~в,лмР. јутов нтъ н^лл, лбпв вмлfl лунъл,мутъл л фу,,оувмлfl д260 тт~лъР,ол ывоШмы лунъл,мутъШ њїє. єн ф ,лоу, ум тутъ,оflо 30-50 ъРт. лпф/плм i фпуоШ. јв в нупфовнтууЧѕљѓцєќѓ?њїд? е№љѓљй№? ъуп 35 < 4 2001

бу,млвп тъ,у њїє ф у,, в,ол ф л 95Рћ, 2 плм л уiокол ,у оШы. єупфовнтууЧ бу,млв TthS7 т Eco16S њїє ф у,улол , Чыщв в 20 пѕ ъ лт-дт, ї 7.6, 7 пѕ MgAc2, 350 пѕ NH4Cl, 4 пѕ пв нфъуъмуо. њтъ,у Чвон TthS7 ф у,, в,ол 10 плм ф л 65Рћ л уiокол у 0Рћ. 2 лол 4 фпуоfl щ ,,пвмъ Eco16S њїє л т~въмув нуол~втъ,у Чвон TthS7 лмныЧлу,ол бвоШму 30 плм ф л 42Рћ., бъвп футов тпв?л,млfl , нумв~муп уЧШвпв 200 пно - вв 30 плм л уiокол у нупмъмуи ъвпфв ъы Р. єупфовнтууЧ бу,млв EcoS7 т Eco16S њїє ф у,улол , Чыщв в 20 пѕ ъ лт-дт, ї 7.6, 15 пѕ MgAc2, 200 пѕ NH4Cl, 4 пѕ пв нфъуъмуо. 2 лол 4 фпуоfl щ ,,пвмъ Eco16S њїє л т~въмув нуол~втъ,у Чвон EcoS7 лмныЧл у,ол бвоШму ф л 30 плм 37Рћ, бъвп футов тпв?л,млfl , нумв~муп уЧШвпв 200 пно - вв 30 плм л уiокол у нупмъмуи ъвпфв ъы Р. №бпв вмлв нкылiтfl нумтъмъ лтту^л^лл ф у,улол фу уфлтммуи мвв пвъулнв щлоШъ^лви м млъ у^воооубмРi пвпЧ мi [20]. њцёќѓ?§д§? № љећќьсцї№ц соfl лбы~вмлfl њїє-Чвону,Рi ,блпувитъ,ли, уф ввоflлi тЧу ны поуи тыЧ~тъл^Р Чнъв лоШмРi лЧутуп, ЧРо ,РЧ м улм лб ,ыi но~в,Рi Чвону, тЧу нл - лЧутупмРи Чвоун S7. њмвв, , Чуъi оЧу ъу ли еу,,му, [21, 22] л ћфл лм [23], т фупуШ тъыфвм~ъуи лтту^л^лл Чвону, ЧРоу фунбму, ~ъу Чвоун S7 - ъу улм лб ~въР вi Чвону, (S4, S7, S8 л S15), нуъуРи ,iулъ , тутъ, плмлпоШмРi њїј-~тъл^, туi мflлi уЧы ыфну,ны л Чолбны н мъл,муи нумщу п^л 16S њїє. їлв iытуп т туъ . [5] ЧРоу фунбму, ~ъу уЧ ъмРи ф у^втт - тЧу н поуи тыЧ~тъл^Р лЧутуп - уф ввоflвътfl, , утму,муп, ,ыпfl Чвонпл - S4 л S7. зблпувитъ,л 16S њїє т Чвонуп S4 фут,flвмР тлтъвпъл~втнлв ЧуъР с фв т туъ . [24, 25], , ъу , впfl нн у њїє-Чвону,уп ,блпувитъ,лл оfl S7 ол?Ш ъ л ЧуъР1 [10, 13, 19]. ео,,у fl флумв тнлп Чуъп лб оЧу ъули ћфл лм [27] л злъъпмм [28] лЧутупР ъв пущлоШмРi Чнъв ли Thermus thermophilus, ,му нн л лi нупфумвмъР, у,уоШму му тъол ттпъ л,ъШтfl нн фв тфвнъл,мРи уЧвнъ оfl тъ ынъы мРi лттову,мли пвъууп њћд. є м~оы мтъуflви ЧуъР ЧРол лб,втъмР ммРв њћд оfl ,ыi ъв пущлоШмРi Чвону, S7 - TthS7 [7] л BstS7 [8]. еуовв ъу,,у, ЧуъР фу т?лщ у,нв тъ ынъы Р Tth30S пвъууп њћд ,волтШ мтъуоШну ытфв?му [29, 30] л фуб,уоflол мвflъШтfl м тнуув фуfl,овмлв тъ ынъы мРi пувови т ъупмРп
1

јутов ъу,,у, нн ынуфлтШ ЧРо футом , фв~ъШ, мп тъоу лб,втъму у фыЧолн^лл е нл-ьлм,, т туъ . [26]

4

њттуiлм л .

H28

H29

H30

H30

H41

H41

H42

H42

H29

H43

H43

H28

њлт. 1. ћ ,мвмлв фв ,л~мРi тъ ынъы щ ,,пвмъу, D3LH 3'-нум^в,Рi упвму, 16S њїє E. coli (Eco16S њїє) [13] л T. thermophilus (Tth16S њїє). їыпв ^лfl мыновуълу, оfl Eco16S њїє - тъм ъмfl, оfl Tth16S њїє - ту,,отму PDB 1FJF Tth30S [1]. ьл мРп ? лщъуп ,РвовмР мвлвмъл~мРв мыновуълР. с,ыъflкв,Рв ы~тънл ,РвовмР тв Рп ^,въуп, лтфуоШбу,м тъм ъмfl мыпв ^лfl (нн м лт. 2).

H41 H30 H28 H29

H41

H43

H42

њлт. 2. ћ ,мвмлв ,ъу л~мРi тъ ынъы щ ,,пвмъу, D3LH 3'-нум^в,Рi упвму, 16S њїє E. coli (Eco16S њїє) [13] л T. thermophilus (Tth16S њїє). їыпв ^лfl ,ыъflкв,Рi ы~тъну, - тъм ъмfl (нн м лт. 1). їыновуълмРв бпвмР Tth16S њїє ынбмР м тъм ъмуи тiвпв ,ъу л~муи тъ ынъы Р Eco16S њїє тъ вонпл. №б-б бм~лъвоШмуи л,в ,,вм^лл футову,ъвоШмутъл мыновуълу, тъ ынъы ?флоШнл ї41 Tth16S њїє ф л,ввм м ,тъ,нв уъвоШму.

б в?вмлвп, ~ъу л ф улбу?оу ту,твп мв,му [1, 2]. зтовтъ,лв ъу,,у ,убмлно ноттл~втнfl ловпп: тъ ынъы мРв ммРв фуоы~вмР оfl ъв пущлоШмРi Чвону, л лЧутуп, , ъу , впfl нн ф н-

ъл~втнл ,тв Члуiлпл~втнлв, щымн^лумоШмРв л ,,вмвъл~втнлв ммРв ЧРол фуоы~вмР оfl лЧутуп E. coli. њв?вмлв ъуи ловппР фыъвп т ,млъвоШму,,у молб њїє-Чвону,Рi ,блпувитъѕљѓцєќѓ?њїд? е№љѓљй№? ъуп 35 < 4 2001

№ёќ?цї№ц ћз?ё?здї№? ецѓєд

5

H41

H43

H42

H29 H28 h1

H41

h2 h3 h5

h4 b1

b2 h7

h6

њлт. 3. љ ъу,,умоШмРв ф увн^лл ъ въл~муи тъ ынъы Р нупфовнт щ ,,пвмъ D3LH 3'-нум^в,у,,у упвм Tth16S њїє т Чвонуп TthS7, нуъу Рв фуоы~вмР ,Р~овмвмлвп лб тъ ынъы Р Tth30S (PDB 1FJF) [1]. ў ,,пвмъ њїє лбуЧ квм т,въоРпл овмъпл, S7 - ~в мРп ^,въуп. љЧубм~вмлfl овпвмъу, ,ъу л~муи тъ ынъы Р Tth16S њїє л TthS7 тууъ,вътъ,ыъ лт. 1, 2, 4,5.

,ли пуквъ унбъШтfl у~вмШ фоууъ,у мРп, нн ъу тоы~лоутШ, мф лпв , т щлоу,,вмвъл~втнлп молбуп ,ъу л~муи тъ ынъы Р 16S њїє [31]. з мтъуflвв , впfl мв тывтъ,ывъ нуол~втъ,вммРi пвъуу, лбы~вмлfl ,блпувитъ,лfl ф уъflквммРi пуовныо њїє т мвЧуоШ?лпл Чвонпл. јуъупы м фв ,уп ъфв ЧуъР мвуЧiулпу ЧРоу ,РЧ ъШ щ ,,пвмъ 16S њїє, вн,ъму ф втъ,оflли ы~тъун т,flбР,млfl Чвон S7. љтму,Р,flтШ м ммРi iлпл~втнуи пулщлн^лл [11, 12, 32] л вов^лумму,,у молб [13, 14], ЧРо ,РЧ м щ ,,пвмъ 3'-нум^в,у,,у упвм 16S њїє2. ј л ъуп ф вфуо,,оутШ, ~ъу оfl фуоы~вмлfl Чбу,Рi ммРi ,тв овпвмъР ,ъу л~муи тъ ынъы Р 16S њїє, щу пл ылв ы~тъун т,flбР,млfl S7, уокмР туi мflъШтfl. ?ълп ытоу2

,лflп фуомутъШ ыу,овъ,у flо щ ,,пвмъ D3LH 16S њїє, фуоы~вммРи , оЧу ъу лл е нльлм,, [13, 14]. дмолб фуfl,л,?витfl тъ ынъы Р Tth30S [1] фунбо, ~ъу ,РЧ ммРи щ ,,пвмъ 16S њїє витъ,лъвоШму пуквъ вн,ъму ф втъ,оflъШ тъ ынъы ы ы~тън т,flбР,млfl S7 ( лт. 1, 2 л 3). ј л фомл у,млл ммуи ЧуъР ф лу му ф вфуо,,о, ~ъу тъ ынъы нупфовнт 3'-нум^в,у,,у упвм Tth16S њїє т Чвонуп TthS7 (Tth16S њїє - TthS7) , тутъ,в Tth30S Чывъ фуоы~вм фу ммРп њћд. јв ,Рв кв фуфРънл т ,млъвоШму,,у пувол у,млfl тъ ынъы Р нупфовнту, Tth16S њїє - TthS7 л Eco16S њїє - EcoS7 flтму ф увпумтъ л у,ол, ~ъу щу поШмув лтфуоШбу,млв Члуiлпл~втнлi ммРi мв,убпукму. з т,flбл т ълп ЧРоу в?вму фуоы~лъШ л ф утовлъШ т,уитъ, футову,ъвоШмуи тв лл нупфовнту,, , нуъу Рi уЧflбъвоШму ф лтыътъ,у,о нупфумвмъ т лб,втъмуи ъ въл~муи тъ ынъы уи: Tth16S њїє - TthS73, Eco16S њїє - TthS7, Eco16S њїє - EcoS7. єо3

з фыЧолн^лл лтфуоШбу,мР товылв мб,млfl щ ,,пвмъу, 16S њїє: 3'-нум^в,Рп упвмуп мбР,вътfl щ ,,пвмъ 16S њїє т нуу лмъпл мыновуълу, 925 - 1394 оfl Eco16S њїє л ?флоШнпл 28, 29, 30, 41-43, б лтно~вмлвп туЧтъ,вмму 3'-нум^в,у,,у иум 16S њїє т нуу лмъпл 1395 -1542, нуъу Ри мбР,вътfl 3'-нум^в,Рп иумуп. ќну у~вммРв , лмъР 3'-нум^в,у,,у упвм мб,мР нн ы е нл-ьлм,, [13]. ѕљѓцєќѓ?њїд? е№љѓљй№? ъуп 35 < 4 2001

јуоы~вмлв нупфовнт Tth16S њїє - TthS7 л лбы~вмлв в,,у т,уитъ, ттпъ л,вътfl нн ъвiмл~втнли ъф, нуъу Ри ,Рфуомflвътfl , мтъуflвв , впfl.

6
-10 10

њттуiлм л .
20 l1 50 l3 90 60

d 30 l2 70 l4 110 l5 150 l7 160 80 40

h1

h2

h3 100

h3

b1 120

b2 130 l6 170

h4 140

h4

h5

h6

h6

d

њлт. 4. ћ ,мвмлв фв ,л~мРi тъ ынъы внупЧлммъмРi лЧутупмРi Чвону, S7 E. coli (EcoS7) л T. thermophilus (TthS7). дплмунлтоуъР, мв ф лмовклв ыъвмъл~мРп Чвонп, ,РвовмР тв Рп ^,въуп л лпвъ уъ л^ъвоШмы мыпв ^л. ївлвмъл~мРв 76 плмунлтоуъ ,РвовмР кл мРп ? лщъуп. њбпвън овпвмъу, ,ъу л~муи тъ ынъы Р TthS7 м ту,,отму PDB 1FJF Tth30S [1]: d - мвыфу flу~вммРи ы~тъун, l - фвъоfl, h - -тфл оШ, b - -ъflк.

~в,Рп , ъуи тв лл fl,оflвътfl ,,във уоу,,л~мРи нупфовнт Eco16S њїє - TthS7. з ммуп тоы~вTthS7 пукму ттпъ л,ъШ нн ф л умРи "пыъмъ" EcoS7 ( лт. 4, 5). ј лпвмвмл пыъ,,вмвб Чвон оfl лбы~вмлfl њїє-Чвону,Рi ,блпувитъ,ли ,тв,, туфыътъ,ыъ ,в ф уЧовпР: ф л мв,,ъл,муп щщвнъв пыъ^ли Чвон м т,flбР,млв т њїє ъ вЧывътfl бол~ъШ футовтъ,лfl ,убпукму,,у плт-щуолм,, пыъмъму,,у Чвон л футовтъ,лfl туЧтъ,вмму плмунлтоуъмРi бпвм , бумв њїєЧвону,у,,у нумънъ. соfl ф л умРi , л^ли Чвон фв ,fl ф уЧовп т,улътfl н плмлпыпы. ќнбмлв м ф лм^лфлоШмы ,убпукмутъШ тывтъ,у,млfl ,,във уоу,,л~му,,у нупфовнт Eco16S њїє - TthS7 in vitro ЧРоу фуоы~вму мпл мвв [33] оfl вов^лумму,,у ф улб,уму,,у щ ,,пвмъ D3LH 16S њїє D3LH-1-2-3a [13]. зубпукмутъШ ,,във уоу,,л~му,,у ,блпувитъ,лfl ту,,отывътfl л т ммлпл Чуъпл їупы Р фу ,,във уоу,,л~муи тЧу нв лЧутуп [34]. сммРв in vivo ънкв фуъ,в къ ,убпукмутъШ ,,във уоу,,л~му,,у ,блпувитъ,лfl - Чыы~л нтф вттл у,ммРп т фобплР , новънi E. coli, Чвоун TthS7 ,но~вътfl , iубflитнлв лЧутупР E. coli ([15], єуфРоу, л туъ ., мвуфыЧолну,ммРв ммРв).

њлт. 5. ћ ,мвмлв фу,в iмутъви ъ въл~мРi тъ ынъы лЧутупмРi Чвону, S7 E. coli (EcoS7) л T. thermophilus (TthS7) (PDB 1FJF Tth30S [1]). ?в мРп ^,въуп уЧубм~вмР плмунлтоуъР, мвлвмъл~мРв ы TthS7 л EcoS7 ( лт. 3), ЧвоРп ^,въуп - лвмъл~мРв плмунлтоуъР. ћ,в iы ,млб фунбмР , ъвоШмРв ф увн^лл S7 уъмутлъвоШму 16S њїє-т,flбР,в,,у ^вмъ , нуъу Ри оfl ^вмъ оШмуи ф увн^лл тууъ,вътъ,ывъ ,лы т,в iы.

єумтъ ыл у,млв тыфв -ф уы^вмъу, E. coli оfl Чвону, TthS7 л EcoS7 ј л нумтъ ыл у,млл тыфв -ф уы^вмъу, Чвон S7 ъ вЧывътfl ы~лъР,ъШ ъ ымутъл ноумл у,млfl л нтф вттлл в,,ыоflъу мРi Чвону,, фу,Р?вмлв нум^вмъ ^лл нуъу Рi ъунтл~му оfl новънл. ћ ,мвмлв фв ,л~мРi тъ ынъы Чвону, S7 лб бол~мРi лтъу~млну, ,Рfl,лоу , лЧвоШмутъШ N-нум^в,Рi футову,ъвоШмутъви Чвон [7-9]. јуъупы оfl ноумл у,млfl ЧРол лтфуоШбу,мР ,внъу Р, уф ввоflлв тлмъвб внупЧлммъмРi
ѕљѓцєќѓ?њїд? е№љѓљй№? ъуп 35 < 4 2001

№ёќ?цї№ц ћз?ё?здї№? ецѓєд

7

Чвону, т 6 His м N-нум^в, ~ъу уЧвтфв~л,въ пнтлпоШмы ф утъуъы л щщвнъл,мутъШ ,Рвовмлfl S7. јуоы~вмлв тыфв -ф уы^вмъ E. coli оfl Чвон TthS7 н ъну уфлтму мвв [15]. йвм ъв пущлоШму,,у Чвон tthS7 ЧРо ноумл у,м , ,внъу pQE32 фу нумъ уоШ ф упуъу щ,, §5 т ъмвпуп lac-уфв ъу у,. ј л лмын^лл IPTG ънfl нумтъын^лfl нтф вттл у,о внупЧлммъмРи Чвоун, нуъу Ри щщвнъл,му ,Рвоflотfl щщлммуи i упъу,, щлви м Ni-NTA-,, убв. јутову,ъвоШмутъШ 6 His тъ ынъы му уъ~ыкотШ уъ ыъвмъл~муи футову,ъвоШмутъл Чвон ,,ввмлвп пвкы млпл Pro ( лт. 4), ~ъуЧР б,вупу т,втъл н плмлпыпы ,убпукмув ,олflмлв уфуомлъвоШмуи N-нум^в,уи футову,ъвоШмутъл м ,блпувитъ,лв т 16S њїє. ћыфв -ф уы^вмъ TthS7 м утму,в тъм ъмРi ?ъппу, E. coli унботfl ,,вмвъл~втнл поу тъЧлоШмРп, фу-,ллпупы, ,товтъ,лв "ъвны~втъл" ф упуъу . №тфуоШбу,млв ?ъпп E. coli M15, тув кв,,у фобплы pREP4 т уфуомлъвоШмуи нуфлви ,,вм lac- вф втту , ытъ млоу ъы ф уЧовпы. соfl нумтъ ыл у,млfl тыфв -ф уы^вмъ E. coli оfl Чвон EcoS7, фу,Р?вммfl нтф вттлfl нуъу у,,у уокм ЧРъШ ф лу му Чуовв ъунтл~муи, ~вп TthS7, лтфуоШбу,м тлтъвп ?ъыл [35]. ?ъппР E. coli з л є тув къ , , лмъ Чвон S7 - тууъ,вътъ,вмму, ну уънли л олммРи, нуъу Ри лпввъ уфуомлъвоШмы футову,ъвоШмутъШ лб 24 плмунлтоуъ м ћ-нум^в [36]. солммРи , лмъ ,,вм Чвон, тув кв,,у уЧ ф л умРi ъв плмл ылi ъ лфовъ, ЧРо ноумл у,м , ,внъу pET28b+, уЧвтфв~л,ли тлмъвб внупЧлммъму,,у Чвон т 6His м N-нум^в, нуъу Рв уъвовмР уъ ыъвмъл~муи футову,ъвоШмутъл S7 тыЧтъ ъмРп ы~тънуп оfl ъ упЧлм. єн л , тоы~в нтф вттлл TthS7 , кв , уътыътъ,лл лмын^лл тъм ъмРи ?ъпп E. coli BL21(DE3) лпво млбны тну утъШ утъ, ,ллпу лб-б "фуъвнмлfl" ф упуъу . №тфуоШбу,млв ?ъпп E. coli BL21 gold (DE3) pLysE ытъ млоу ъы ф уЧовпы. зРвовмлв Чвону, TthS7 л EcoS7 №тфуоШбу,млв ноумл у,ммРi Чвону, S7 м~оутШ уъмутлъвоШму мв,му [7, 8, 15, 37]. єоумлу,млв фуб,уоflвъ ,,улъШ футову,ъвоШмутъШ 6 His м улм лб нум^у, Чвон л лтфуоШбу,ъШ щщлммы i упъу,, щл оfl щщвнъл,му,,у ,Рвовмлfl Чвон , умы тъл. соfl Чвон S7 ъуъ ф лвп пукму лтфуоШбу,ъШ Чо,,у fl ,уо^луммуи , лЧвоШмутъл N-нум^в,Рi футову,ъвоШмутъви Чвон [7-9]. з ммуп лттову,млл ф л уъ Чуънв пвъуу, ,Рвовмлfl Чвон S7 утуЧув ,млпмлв ывоflоутШ нумъ уо б в,,у њїєт,flбР,ви нъл,мутъШ. ј л ,Рвовмлл TthS7 лб новъун E. coli iу у?ли ,Рiу Чвон ъ вЧу,о олблт новъун , ф лѕљѓцєќѓ?њїд? е№љѓљй№? ъуп 35 < 4 2001

єкылвтfl нумтъмъР лтту^л^лл (мѕ) оfl бол~мРi нупфовнту, лЧутупму,,у Чвон S7 т щ ,,пвмъпл 3'-нум^в,у,,у упвм 16S њїє* єупфовнт BstS7-Bst16S њїє EcoS7-Eco16S њїє EcoS7-Eco16S њїє TthS7-Eco16S њїє єK 480 630 С 80 6.5 С 1.9 35.8 С 9.3 Mg2+/K+, пM 20/350 20/350 15/200** 7/350** ћтРон [10] [13] ммfl Чуъ ммfl Чуъ

* з ъЧол^ы мв ,но~вмР ммРв ЧуъР [26]. ** з мтъуflви Чуъв лтфуоШбу,м NH4Cl ,пвтъу KCl.

тыътъ,лл 6ѕ iоу лтъу,,у ,,ымллм, , т,flбл т ~вп оfl вмъы ^лл TthS7 лтфуоШбу,ол ф упвкыъу~мРи фв в,у Чвон , тъ,у 6ѕ пу~в,лмР т футовылп фв в,ууп , тъм ъмРи Чыщв оfl i мвмлfl [18]. ј л нтф вттлл Чвон EcoS7 , новънi E. coli уЧ быътfl ъвоШ^ ,но~вмлfl, фуъупы оfl лi тъ,у вмлfl лтфуоШбу,ол 8ѕ пу~в,лмы. соfl щщлммуи i упъу,, щлл м Ni-NTA-,, убв Чвоун ту Чл у,ол м нуоумны, бъвп фо,му фумлкол нум^вмъ ^л пу~в,лмР у мыов,уи. јутов о^лл Чвон лплбуоуп в,,у фв в,улол , тъм ъмРи Чыщв оfl i мвмлfl. №бы~вмлв нупфовнтууЧ бу,млfl Чвону, TthS7 л EcoS7 т Eco16S њїє йупуоу,,л~мув ,блпувитъ,лв лмл,лыоШму,,у Чвон S7 т 16S њїє уфлтму оfl ^воуи 16S њїє E. coli [11, 12], оfl 3'-нум^в,у,,у упвм т 3'-нум^в,Рп иумуп Bst16S њїє2 т BstS7 [10], 3'-нум^в,у,,у упвм 16S њїє E. coli л в,,у вов^луммРi , лмъу, [13, 14] (ъЧол^). љмну ф flпув т ,мвмлв ълi ммРi бъ ымвму, футнуоШны умл ЧРол фуоы~вмР мв ъуоШну оfl бол~мРi щ ,,пвмъу, 16S њїє, му л , бол~мРi ытоу,лfli. јутнуоШны Члм мРи нупфовнт уЧ бывътfl ф л ,блпувитъ,лл ,ыi нумщу п^лумму оЧлоШмРi пн упуовныо - њїє л Чвон - ымлщлн^лл лi нумщу п^лл мвуЧiулпу ывоflъШ утуЧув ,млпмлв. ѓЧуи ф вф ъ њїє ф нъл~втнл ,тв,, ф втъ,оflвъ туЧуи мЧу бол~мРi нумщу пв у,, уфлтР,впРi, мф лпв , , ъв плмi "нумщу п^лумму,,у ом?щъ" њїє [38]. зллпу, фуъупы лбуъв пР т,flбР,млfl оfl њїєЧвону,Рi нупфовнту, млну,, мв утъл,,ъ фоъу,Рi бм~вмли , 100% - нтфв лпвмъоШмРи щнъ, нуъу Ри мвумун ъму, му Чвб уЧflтмвмли, нумтъъл у,отfl пму,,лпл, мф лпв [10, 13, 24]. єумщу п^луммfl ,,във у,,вммутъШ пуквъ ЧРъШ уЧытоу,овм мв ъуоШну ф у^вы уи ,Рвовмлfl

8 PHK 0.8 0.6 0.4 0.2
b

њттуiлм л . [RNP] / [P] 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 0.20 0.15 0.10 0 5 10 15 [Mg 2+], пѕ 20 25 0.05 0 1 2 3 456 [RNP], мѕ 7 8 9 10

њлт. 6. ё,лтлпутъШ нупфовнтууЧ бу,млfl уъ нум^вмъ ^лл луму, Mg2+ оfl ,ыi ълфу, нупфовнту, EcoS7 - Eco16S њїє ( ) л TthS7 - Eco16S њїє ( ). єупфовнтууЧ бу,млв оfl уЧулi ълфу, нупфовнту, ф у,улоутШ ф л 350 пѕ NH4Cl. RNAb - уоfl т,flбммуи , нупфовнтв њїє.

њлт. 7. сл,, ппР ћнъ~ оfl нупфовнтууЧ бу,млfl TthS7 - Eco16S њїє ф л ф в, лъвоШмуп ф у,, в,в Чвон TthS7 ф л 37 ( ) лол 65Рћ ( ). №тiумfl нум^вмъ ^лfl Eco16S њїє - 10 мѕ. [RNP] л [P] - нум^вмъ ^лл нупфовнт л Чвон (мѕ), тууъ,вътъ,вмму.

ф вф ъ њїє, му л тпуи ф л ууи тъ ынъы Р њїє. з т,flбл т ълп , ммуи Чуъв ф вф ъ щ ,,пвмъ њїє вмъы л у,ол ф л 90Рћ т футовылп вбнлп уiоквмлвп ,у оШы. ћфутуЧ у^вмнл ф пвъ у, њїє-Чвону,у,,у ,блпувитъ,лfl ънкв фуовклъ ымлщлн^лл. єн ф ,лоу, оfl уф ввовмлfl нкылiтfl нумтъмъ т,flбР,млfl тъ уflътfl лбуъв пР т,flбР,млfl Чвон т њїє м утму,млл ммРi, фуоы~вммРi олЧу т,flбР,млвп нупфовнт м млъ у^воооубмРi пвпЧ мi, олЧу т фупуШ овнъ ущу вб нупфовнт , јддй (пвъу "т,л,, фу,лкмутъл"). єкыflтfl нумтъмъ тту^л^лл нупфовнт тт~лъР,вътfl нн нум^вмъ ^лfl Чвон ф л фуоу,лммуп бм~вмлл фоъу лбуъв пР ф л ытоу,лл, ~ъу нум^вмъ ^лfl Чвон пму,,у ЧуоШ?в нум^вмъ ^лл ълъ ывпуи њїє. соfl ъу,,у , нтфв лпвмъi уЧР~му лтфуоШбыъ тову,Рв (л, нн ф ,лоу, мв уф ввоflвпРв) нум^вмъ ^лл ,Ртуну пв~вмуи [32P]-њїє л у~вмШ ЧуоШ?лв пуоШмРв лбЧРънл Чвон. з мтъуflви Чуъв оfl лбпв вмлfl нкылiтfl нумтъмъ лтту^л^лл нупфовнту, ,РЧ м пвъу т,flбР,млfl нупфовнту, м млъ у^воооубмРi пвпЧ мi. є упв ъу,,у, тъм ъмРв лбуъв пР т,flбР,млfl ЧРол фу,в ,,мыъР оШмви?впы молбы т фупуШ ф вуЧ бу,мли ћнъ~ [39]. йвъв уоу,,л~мув ,блпувитъ,лв щ ,,пвмъ 3'-нум^в,у,,у упвм Eco16S њїє c ъв пущлоШмРп Чвонуп TthS7 њїє-Чвону,Рв нупфовнтР т ъв пущлоШмРпл Чвонпл ф втъ,оflъ ЧуоШ?уи лмъв вт, фу-

тнуоШны fl,оflътfl млЧуовв ,в уflъмРпл нмлъпл оfl ф у,ввмлfl тъ ынъы му,,у молб щлбл~втнлпл пвъупл - њћд л ?ѕњ. з лттову,мллfli ,блпувитъ,ли 16S њїє т Чвонпл ъ л^лумму лтфуоШбыътfl тъм ъмРв ытоу,лfl внумтъ ын^лл поуи тыЧ~тъл^Р лЧутуп - 20 пѕ Mg2+, 350 пM K+ (ъЧо. 1) [10, 13]. љмну оfl нку,,у ълф нупфовнту, уфълпоШмРв ытоу,лfl пу,,ыъ ЧРъШ лмл,лыоШмРпл. јуъупы, ф вкв ,тв,,у, ЧРо уф ввовм уфълпоШмfl оfl нупфовнтууЧ бу,млfl нум^вмъ ^лfl луму, п,,млfl, футнуоШны ъу у~вмШ ,кмРи ф пвъ оfl щу пл у,млfl тъ ынъы Р њїє. љнбоутШ, ~ъу ,,във уоу,,л~мРи нупфовнт пуквъ уЧ бу,ъШтfl ф л млбнлi нум^вмъ ^лfli луму, п,,млfl - 1 пѕ, уфълпып утъл,,вътfl ф л 5 пѕ ( лт. 6). с ы,,уи ,кмРи тфвнъ - ъу ъвпфв ъы мfl вмъы ^лfl Чвон TthS7. ј вфуо,,впfl уфълпоШмfl ъвпфв ъы нумщу п^луммРi фв вiуу, ъв пущлоШму,,у Чвон ф лу му уокм ЧРъШ ,Р?в, ~вп тъм ъму лтфуоШбывпfl ъвпфв ъы 37Рћ. евоун TthS7 ф в, лъвоШму ф у,, в,ол ф л ъ вi ъвпфв ъы i - 37, 42 л 65Рћ, нупфовнтууЧ бу,млв ф у,улол ф л 37 лол 42Рћ. цтол Чвоун TthS7 ф в, лъвоШму ф у,, въ ф л 37Рћ (лол 42) нкыflтfl нумтъмъ лтту^л^лл ЧРо , мвтнуоШну б ЧуоШ?в, ~вп , тоы~в, втол Чвоун ф в, лъвоШму ф у,, въ ф л 65Рћ ( лт. 7). ју-,ллпупы, ,РвовммРи ммРп пвъууп Чвоун TthS7 ф във фв,въ нумщу п^луммРи фв вiу ф л ъвпфв ъы в пвкы 42 л 65Рћ, ~ъу тывтъ,вмму ыоы~?въ в,,у њїє-т,flбР,лв т,уитъ,. љъпвълп вв уму ,кмув товтъ,лв: лтфуоШбывпРи пвъу лбы~вмлfl нупфовнтууЧ бу,млfl унѕљѓцєќѓ?њїд? е№љѓљй№? ъуп 35 < 4 2001

№ёќ?цї№ц ћз?ё?здї№? ецѓєд

9

ботfl утъъу~му ~ы,тъ,лъвоШмРп н нумщу п^луммРп лбпвмвмлflп Чвон л, ,ллпу, вн,ъму уфлтР,въ тп ф у^втт нупфовнтууЧ бу,млfl. љф ввовмлв нкывитfl нумтъмъР лтту^л^лл нупфовнт ЧРоу ф у,ввму ф л лтiумуи нум^вмъ ^лл щ ,,пвмъ 16S њїє 20 мѕ ( лт. 8). йвъв уоу,,л~мРи нупфовнт т ъв пущлоШмРп Чвонуп TthS7 унботfl Чуовв тъЧлоШмРп, ~вп уфлтммРи мвв ,,упуоу,,л~мРи нупфовнт оfl ъв пущлоШму,,у Чвон BstS7 (ъЧол^). йупуоу,,л~мув ,блпувитъ,лв щ ,,пвмъ 3'-нум^в,у,,у упвм Eco16S њїє c Чвонуп EcoS7 ј л нум^вмъ ^лл NH4Cl 350 пѕ (ф л уфълпыпв 200 пѕ) оfl уЧ бу,млfl ,,упуоу,,л~му,,у нупфовнт ъ вЧывътfl ,,у бу Чуовв ,Ртунfl нум^вмъ ^лfl луму, п,,млfl - нн плмлпып 15 пѕ, ф уъл, 5 пѕ оfl ,,във уоу,,л~му,,у нупфовнт ф л ъуи кв нум^вмъ ^лл NH4Cl ( лт. 6). ѕукму ф вфуоуклъШ, ~ъу ънfl ,Ртунfl нум^вмъ ^лfl луму, п,,млfl мвуЧiулп оfl тъЧлолб^лл нумщу п^лл iуъfl ЧР умуи лб ,блпувитъ,ылi пн упуовныо. ју-,ллпупы, ,товтъ,лв ЧуоШ?ви тъЧлоШмутъл ъв пущлоШмРи Чвоун пуквъ ,блпувитъ,у,ъШ т щ ,,пвмъуп 16S њїє ф л млбнлi бм~вмлfli луму, п,,млfl. з т,у у~в вШ, лб-б ЧуоШ?ви нумщу п^луммуи оЧлоШмутъл пвбущлоШмРи Чвоун EcoS7 ъ вЧывъ ЧуоШ?ви тъЧлолб^лл тъ ынъы Р њїє лумпл п,,млfl. №б ъу,,у товывъ, ~ъу ,Ртунfl нум^вмъ ^лfl луму, п,,млfl, фу-,ллпупы, мвуЧiулп оfl щлнт^лл нупфвъвмъмуи оfl ,блпувитъ,лfl т Чвонуп тъ ынъыР щ ,,пвмъ 16S њїє. з т,flбл т ълп лмъв втму уъпвълъШ, ~ъу фу ммРп њћд Tth30S тъ ынъы ы ы~тън т,flбР,млfl 16S њїє т Чвонуп S7 , поуи тыЧ~тъл^в лЧутуп пу,,ыъ щу плу,ъШ ~въР в ,ыъflкв,Рi ы~тън, фоуъму ыфну,ммРв фу ълфы "Чун-у-Чун" ( лт. 3). з уфълпоШмРi ытоу,лfli нкыflтfl нумтъмъ лтту^л^лл ,,упуоу,,л~му,,у нупфовнт EcoS7Eco16S њїє унботШ , 6 б пвмШ?в, ~вп оfl ,,във уоу,,л~му,,у нупфовнт TthS7 - Eco16S њїє. ј ув ,тв,,у ъуъ щщвнъ пукму уЧflтмлъШ бол~лflпл тъ ынъы Р Чвону, EcoS7 л TthS7 , бумв 16S њїє-Чвону,Рi нумънъу, ( лт. 3, 4). свъоШмРи т ,млъвоШмРи тъ ынъы мРи молб фуъвм^лоШмуи бумР њїє-Чвону,Рi нумънъу, оfl ,,упуоу,,л~му,,у л ,,във уоу,,л~му,,у нупфовнту, фуб,уолъ уЧflтмлъШ ъу бол~лв , тъ ынъы мРi ъв плмi (, мтъуflвв , впfl ънfl Чуъ ф у,улътfl). љмну тывтъ,вммРв бол~лfl , 16S њїєт,flбР,ви нъл,мутъл бол~мРi ф вф ъу, Чвон S7 (Чуовв ~вп м , фу flн! §Чо. 1) ,Р,л,,ъ м фв ,Ри фом б Чуъны пвъуу, уфввовмлfl ывоШмуи њїє-т,flбР,ви нъл,мутъл Чвон - i нъв лтълнл, нуъу fl фуб,уолъ
ѕљѓцєќѓ?њїд? е№љѓљй№? ъуп 35 < 4 2001

0.8 a 0.6 PHK
b

0.4 0.2

0 0.8 Ч 0.6 PHK
b

100

200

300

400

0.4 0.2

0 1.0 0.8 [RNP] / [P] 0.6 0.4 0.2

100 200 300 400 500 600 700 [P0], мѕ

,

0

2

4

6

8 10 12 14 16 18 20 [RNP], мѕ

њлт. 8. №буъв пР т,flбР,млfl ( л Ч) л л,, ппР ћнъ~ (,) оfl EcoS7 - Eco16S њїє ( ) л TthS7 - Eco16S њїє ( ). №тiумfl нум^вмъ ^лfl Eco16S њїє - 20 мѕ. [P0] - лтiумfl нум^вмъ ^лfl Чвон, RNAb - уоfl т,flбммуи , нупфовнтв њїє. [RNP] л [P] - нум^вмъ ^лл нупфовнт л Чвон (мѕ), тууъ,вътъ,вмму.

т ,мл,ъШ бол~мРв ф вф ъР Чвон, , ъуп ~лтов ,РвовммРв , бмРi оЧу ъу лfli. зтв тнбммув , фуомуи пв в уъмутлътfl л н лмъв ф въ^лл ммРi фу пыъ,,вмвбы оЧРi њїє-т,flбР,лi Чвону,.

10

њттуiлм л . 17. Henco K. The QIAexpressionist: The high level expression & protein purification system. Hamburg: QIAGEN Press, 1992. 18. Nierhaus K.H. // Reconstitution of ribosomes. Ribosomes and proteins synthesis. A Practical Approach. / Ed. G. Spedding. Oxford: IRL Press, 1989. P. 161-181. 19. Saito K., Nomura M. // J. Mol. Biol. 1994. V. 235. P. 125-139. 20. Spiridonova V.A., Rozdestvensky T.S., Kopylov A.M. // FEBS Lett. 1999. V. 460. P. 353-356. 21. єуфРоу, д.ѕ., §във лм ї.ѓ., јуъфу, д.ј., зтловмну ћ.є., еу,,му, д.д. // елуу ,,. iлплfl. 1976. T. 12. C. 1642-1651. 22. Bogdanov A.A., Kopylov A.M., Shatsky I.N. // Subcell. Biochem. 1980. V. 7. P. 81-116. 23. Vasiliev V.D., Koteliansky V.E., Rezapkin G.V. // FEBS Lett. 1977. V. 79. P. 170-174. 24. Draper D.E., Deckman I.C., Vartikar J.V. // Methods Enzymol. 1988. V. 164. P. 203-220. 25. Vartikar J.V., Draper D.E. // J. Mol. Biol. 1989. V. 209. P. 221-234. 26. Robert F., Gagnon M., Sans D., Michnick S., Brakier- Gingras L. // RNA. 2000. V. 6. P. 1649-1659. 27. є фу, ц.д., ћв н №.ї., § iу,тнли ?.ћ., љ оу, ц.з. // суно. дї ћћћњ. 1986. §. 289. ћ. 1263-1266. 28. Glotz C., Mussig J., Gewitz I.S., Makowski I., Arad T., Yonath A., Wittmann H.G. // Biochem. Int. 1987. V. 15. P. 953-960. 29. Clemons W.M., May J.L.C., Wimberly B.T., McCutcheon J.P., Capel M.S., Ramakrischnan V. // Nature. 1999. V. 400. P. 833-840. 30. Tocilj A., Schlunzen F., Janell D., Gluhmann M.,Hausen H. A. S., Harms J., Bashan A., Bartels H., Agmon I., Franceschi F., Yonath A. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. V. 96. P. 14252-14257. 31. Woese C.R., Magrum L.J., Gupta R., Siegel R.B., Stahl D.A., Kop J., Crawford N., Brosius J., Gutell R., Hogan J.J., Noller H.F. // Nucleic Acids Res. 1980. V. 8. P. 2275-93. 32. Urlaub H., Thiede B., Muller E.-C., Brimacombe R., Wittmann-Liebold B. // J Biol Chem. 1997. V. 272. P. 14547-14555. 33. Spiridonova V.A., Golovin A.V., Drygin D.Yu., Kopylov A.M // Biochem. Mol. Biol. Internat. 1998. V. 44. P. 1141-1146. 34. Higo K., Held W., Kahan L., Nomura M. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1973. V. 70. P. 944-948. 35. Studier F.W., Rosenberg A.H., Dunn J.J., Dubendorff J.W. // Methods Enzymol. 1990. V. 185. P. 60-89. 36. Reinbolt J., Tritsch D., Wittmann-Liebold B. // Biochimie. 1979. V. 61. P. 501-522. 37. Culver G.M., Noller H.F. // RNA. 1999. V. 5. P. 832-843. 38. Chen S.-J., Dill K.A. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. V. 97. P.646-651. 39. з щуоупвв, C.с., йы в,л~ є.й. // елунлмвълн: ј нъл~втнли ны т. ѕ.:ўд№њ-јњцћћ, 1999.
ѕљѓцєќѓ?њїд? е№љѓљй№? ъуп 35 < 4 2001

д,ъу Р ,Р къ лтн вмм Чо,,у мутъШ ї.№. ѕъ,лвмну б ф вутъ,овммы фобплы Z14.2, ѕ. їупы в - б фобплы pNO3070, ѓ. е нл-ьлм,, - б фобплы pFD3LH, ћ.д. ћфл лмы л з.ї. §?ол^нупы - б нумтыоШъ^лл фу т~въмуи ~тъл, џ. їуоов ы - б уЧтыквмлв вбыоШъъу, у фыЧолн^лл, д.д. еу,,му,ы - б футъуflммув ,млпмлв, фув кны, лтныттлл л нуппвмълл ынуфлтл, ънкв в^вмбвмъ - б ^вммРв бпв~млfl. њЧуъ фув км ,, мъпл њуттлитну,,у щум щымпвмъоШмРi лттову,мли (01-04-48643), њўў№-йўцї (99-04-39072), ќмл,в тлъвъР њуттлл (991700, 992185) л ~тъл~му ,, мъпл њўў№еї§ћ (00-04-02007), њўў№ (01-04-48603), ѕлммынл (415/99), ќмл,в тлъвъР њуттлл 992185 л ј ,лъвоШтъ, ѕутн,Р (2.1.172). ћј№ћљє ѓ№§цњд§ќњ?
1. Wimberly B.T., Brodersen D.E., Clemons W.M. Jr., Morgan-Warren R.J., Carter A.P., Vonrhein C., Hartsch T., Ramakrishnan V. // Nature. 2000. V. 407. P. 327-339. 2. Schluenzen F., Tocilj A., Zarivach R., Harms J., Gluehmann M., Janel D., Bartes H., Agmon I., Franceschi F., Yonath A. // Cell. 2000. V.102. P. 615-623. 3. Ban N., Nissen P., Moore P.B., Steitz T.A. // Science. 2000. V. 289. P. 905-920. 4. Cate J.H., Yusupov M.M., Yusupova G.S., Eamest T.N., Noller H.F. // Science. 1999. V. 285. P. 2095-2104. 5. Nowotny V., Nierhaus K.H. // Biochemistry. 1988. V. 27. P. 7051-7055. 6. Zengel J.M., Lindahl L. // Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol. 1994. V. 47. P. 331-370. 7. Wimberly B.T., White S.W., Ramakrishnan V. // Structure. 1997. V. 5. P. 1187-1198. 8. Hosaka H., Nakagawa A., Tanaka I., Harada N., Sano K., Kimura M., Yao M., Wakatsuki S. // Structure. 1997. V. 5. P. 1199-1208. 9. Frederick K., Dunny G.M., Noller H.F. // J. Mol. Biol. 2000. V. 298. P. 379-394. 10. Miamoto A., Usui M., Yamasaki N., Yamada N., Kuwano E., Tanaka I., Kimura M. // Eur. J. Biochem. 1999. V. 266. P. 591-598. 11. Stern S., Powers T., Changchien L., Noller H.F. // Science. 1989. V. 244. P. 783-790. 12. Noller H.F., Moazed D., Stern S., Powers T., Allen P.N., Robertson J.M., Weiser B.M., Triman K. // The Ribosome. Structure, function, evolution / Eds. Hill W.E., Dahlberg A., Garrett R.A., Moore P.B., Schlessinger D., Warner J.R. Washington: ASM Press, 1990. P. 73-92. 13. Dragon F., Brakier-Gingras L. // Nucleic Acids Res. 1993. V. 21. P. 1199-1203. 14. Dragon F., Payant C., Brakier-Gingras L. // J. Mol. Biol. 1994. V. 244. P. 74-85. 15. Karginov A.V., Karginova O.A., Spiridonova V.A., Kopylov A.M. // FEBS Lett. 1995. V. 369. P. 158-160. 16. Yakhnin A.V., Vorozheykina D.P., Matvienko N.I. // Nucleic Acids Res. 1990. V. 18. P. 3659.

№ёќ?цї№ц ћз?ё?здї№? ецѓєд

11

@@@@@

ѕљѓцєќѓ?њїд? е№љѓљй№? ъуп 35 < 4 2001