Документ взят из кэша поисковой машины. Адрес оригинального документа : http://plantphys.bio.msu.ru/education/mc.doc Дата изменения: Fri Dec 16 20:14:00 2011 Дата индексирования: Mon Oct 1 19:26:52 2012 Кодировка: koi8-r

Задача 2. Изучение начальных этапов поглощения ионов корнями растений с
помощью красителя метиленового синего.

Первый этап (быстрый) поглощения элементов минерального питания у
высших наземных растений включает: а) адсорбцию ионов на поверхности корня
и б) проникновение ионов путем диффузии в свободное пространство клеточных
стенок ризодермы корня. Второй этап (медленный) - это избирательный
транспорт через плазмалемму и поступление ионов в клетки корня, а также
транспорт по апопласту (объединенным клеточным стенкам клеток корня).
Для изучения первичных этапов поглощения удобен основной краситель
метиленовый синий (МС), который не проникает внутрь живых клеток.
[pic]
Это соединение, у которого окрашенным является адсорбируемый катион, что
позволяет спектрофотометрически наблюдать за его убылью из опытного
раствора.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ:
Построить графики зависимости поглощения МС корнями опытных растений в
зависимости от времени при трех значениях рН (кислый, нейтральный,
щелочной).

ОБЪЕКТОМ ИССЛЕДОВАНИЯ являются 10-20 дневные растения пшеницы.

ХОД РАБОТЫ:
Для работы необходим 0.0002М раствор (исходный) метиленового синего (0,064
мг/мл).
1). В 12 стаканов наливают по 10 мл рабочего раствора МС (0,032 мг/мл -
разведенный в 2 раза исходный раствор МС).
2). Первый стаканчик оставляют в качестве контроля. Концентрация МС в
нем соответствует времени 0 мин. Хорошо промытые 15-20 корней опытных
растений обсушивают фильтровальной бумагой, взвешивают и погружают во
второй стакан с МС на 1 мин. Затем вынимают корни и очень быстро, не ожидая
стекания с них раствора краски, переносят в третий стакан на 1 мин. Затем
время экспозиции корней на растворе МС в стаканчике увеличивают до 2 мин
(четвертый - двенадцатый стаканы). См. таблицу.
3). Из каждого стаканчика отбирают по 1 мл МС в пробирку, доводят объем
дистиллированной водой до 10 мл и перемешивают. Полученные растворы
фотоколориметрируют в 0,5 см кюветах против дистиллированной воды при 670
нм (красный светофильтр). Данные заносят в таблицу. По уравнению
калибровочной прямой рассчитывают концентрацию МС в разведенных растворах.
Калибровочная прямая описывается уравнением:
y=20.7* x - 0.8,
где x - оптическая плотность D670 исследуемого раствора, y - концентрация
МС (мкг/мл) исследуемого раствора (в пробирке). Результаты расчетов заносят
в таблицу.

Сводная таблица полученных данных.

| |Время, мин | | | | | |
|N | |D 670 |МС |МС1 |(МС |(((МС) |
|стаканчика| | |мкг/мл |мг/г |мг/г |мг/г |
| | | | |корней |корней |корней |
| |стаканчи|эксперимент| | | | | |
| |к | | | | | | |
|1(контроль|0 |0 | | | | | |
|) | | | | | | | |
|2 |1 |1 | | | | | |
|3 |1 |2 | | | | | |
|4 |2 |4 | | | | | |
|5 |2 |6 | | | | | |
|6 |2 |8 | | | | | |
|7 |2 |10 | | | | | |
|8 |2 |12 | | | | | |
|9 |2 |14 | | | | | |
|10 |2 |16 | | | | | |
|11 |2 |18 | | | | | |
|12 |2 |20 | | | | | |

МС1 - это количество МС в 10 мл опытного раствора (в стаканчике)
приходящегося на г корней. Для расчета данной величины необходимо знать
концентрацию МС в разбавленном растворе (предыдущий столбик), которую нужно
умножить на 10 (для учета разбавления), умножить на 10 (чтобы перейти к
количеству МС в 10 мл опытного раствора), разделить на 1000 (перейти к мг
МС) и разделить на вес 15-20 корней, выраженный в граммах.
(МС - это изменение количества МС в 10 мл соответствующего опытного
раствора в стаканчике (N=2,3,.,12) по сравнению с количеством МС в
контрольном стаканчике (N=1): (МС = МС1(1) - МС1(N), где N = 2,3,.,12
номера стаканчиков.
(((МС) - это количество МС, поглощенного корнем к данному моменту
времени. Например, через 8 мин (6-ой стаканчик) количество поглощенного МС
= (МС (2) +(МС (3) + . + (МС (6).
Постройте графики зависимости количества поглощенного ( ((МС) (мг/г
корней) от времени при трех значениях рН и сравните их между собой.

Напишите выводы (Объясните: 1/. наличие двух этапов поглощения МС на
графиках,
2/. влияние рН раствора на поглощение МС).

Литература:
«Физиология растений», под редакцией проф. И.П. Ермакова, 2005, с.334-
341.