Документ взят из кэша поисковой машины. Адрес оригинального документа : http://kodomo.cmm.msu.ru/~artemov/term3/sem3prac4.html
Дата изменения: Tue Dec 18 19:14:34 2007
Дата индексирования: Tue Oct 2 11:46:21 2012
Кодировка: Windows-1251
Семестр 3: Блок 1: Практикум 4: Поиск гомологов некодирующей нуклеотидной последовательности

// Семестр 3: Блок 1: Последовательности нуклеиновых кислот

 // EMBL // BLAST // гомологи некодирующей нуклеотидной последовательности

Поиск тРНК, которая была (скорее всего) использована рибосомой при присоединении 4-ого аминокислотного остатка к растущей цепи вашего белка.

Таблица 1. Выбор тРНК

Из банка данных UniProt была получена аминокислотная последовательность. В ней был найден четвертый аминокислотный остаток.

 Аминокислотный остаток в 4-ой позиции белка MURG_ECOLI Q
 Соответствующий кодон в гене murG 5'-CAA-3'
 Идеальный антикодон 5'-UUG-3'
 Сколько можно было бы ожидать разных тРНК для остатка Q
(если опираться на генетический код)?
2
 Сколько тРНК для остатка Q аннотировано в геноме кишечной палочки? 4
 Характеристика выбранной для дальнейшего изучения тРНК:
  название гена glnW
  координаты гена в записи EMBL complement(695979..696053)
  антикодон UUG
(*) Распознаваемый кодон CAR

Поиск всех глутаминовых тРНК в геноме:

    команда:
grep -n "anticodon.*glutamine" ecoli.embl
    результат:
15971:FT                   /note="codon recognized: CAG; anticodon: CUG glutamine
15983:FT                   /note="codon recognized: CAG; anticodon: CUG glutamine
16008:FT                   /note="codons recognized: CAR; anticodon: UUG glutamine
16021:FT                   /note="codons recognized: CAR; anticodon: UUG glutamine

Таким образом, получаем что, вопреки предположению, в геноме кишечной палочки существует 4 разных гена, кодирующих глутаминовые тРНК.

Существуют 2 различных распознаваемых кодона, причем это не CAA и CAG, как можно было предположить, а CAA и CAR, который соответствует обоим возможным кодонам CAA и CAG


Поиск гомологичных тРНК в геноме архебактерии

Таблица 2. Поиск в геноме Pyrococcus furiosus последовательностей, сходных с  глутаминовой  тРНК E.coli

Программа FastA BLASTN MegaBLAST Discontigous
MegaBLAST
Число находок с Е-value < 0,001 1
  0  0  0
Характеристика лучшей находки:
  E-value находки 0.00051
  5.8  5.8  -
  Номер сектора генома 23  116  116  
  AC соответствующей записи EMBL  AE010148  AE010241  AE010241  
  координаты выравнивания(-ий) в записи EMBL  5861..5930
прямая
 2304..2289
обратная
 2304..2289
обратная
 
Аннотация лучшей находки по EMBL
(не аннотирована, аннотирована как тоже
глутаминовая тРНК, как другая тРНК etc.)
tRNA Arg anticodon TCT
(другой кодон!)
 tRNA-Asn
(так же)
  tRNA-Asn
(так же)
 
Примечания если W=9
или 11
Дла W=11
t=16
не находит

Выводы. BLAST находит сходные последовательности с недостаточной достоверностью (большое e-value), но, тем не менее, находится tRNA-Asn, которая также и гдутаминовая. FastA, напротив, дает выравнивание с достаточно хорошим e-value, однако последовательность не является (по крайней мере так не аннотирована) глутаминовой тРНК.

Возможно, поиск гомологов последовательности тРНК затруднен тем, что в ней достаточно много участков, которые не являются специфически соответствующими аминокислоте.