Документ взят из кэша поисковой машины. Адрес оригинального документа : http://kodomo.cmm.msu.ru/FBB/year_02/science_1/diplom_2006/Elpidina.doc Дата изменения: Mon Dec 12 17:30:38 2005 Дата индексирования: Sat Dec 22 07:27:39 2007 Кодировка: koi8-r

Тема работы: ИЗУЧЕНИЕ СТРУКТУРЫ ПИЩЕВАРИТЕЛЬНОЙ ЦИСТЕИНОВОЙ
ПРОТЕИНАЗЫ БОЛЬШОГО МУЧНОГО ХРУЩАКА Tenebrio molitor

Руководители: старший научный сотрудник Института физико-химической
биологии им. А.Н. Белозерского МГУ канд. биол. наук
Элпидина Елена Николаевна
Комн. 235 в здании НИИ физико-химической биологии;
тел.: 939 5551; 8 926 141 39 76
E-mail: elp@belozersky.msu.ru

заведующий лабораторией Института физико-химической биологии им. А.Н.
Белозерского МГУ профессор
Белозерский Михаил Андреевич

В лаборатории проф. М.А. Белозерского Института физико-химической
биологии им. А.Н. Белозерского МГУ совместно с сотрудниками Университета
штата Канзас и Исследовательского центра маркетинга и производства зерна
Департамента сельского хозяйства США проводятся исследования
пищеварительных протеиназ большого мучного хрущака Tenebrio molitor,
являющегося злостным вредителем запасов зерновых культур. Результаты этих
исследований необходимы для разработки новых, эффективных экологически
безопасных методов борьбы с насекомыми-вредителями. Начальные этапы
протеолиза пищевых белков у личинок большого мучного хрущака осуществляют
цистеиновые протеиназы, локализованные в передней части его средней кишки.
В нашей лаборатории в кишечнике личинок идентифицировано не менее шести
форм цистеиновых протеиназ. Одна из них выделена и очищена до гомогенного
состояния. Предварительные данные по характеристике этого фермента
свидетельствуют о его необычном поведении при электрофорезе в присутствии
SDS и гель-фильтрации. В лаборатории американских коллег определена
последовательность кДНК нескольких цистеиновых протеиназ из кишечника этого
насекомого.

Цель дипломной работы: установить, какие особенности структуры
молекулы цистеиновой протеиназы личинок большого мучного хрущака определяют
необычные свойства фермента.

Этапы работы:
- получить гомогенный препарат цистеиновой протеиназы используя методы
гель-хроматографии, ионообменной хроматографии на колонке Mono Q в условиях
высокоэффективной жидкостной хроматографии FPLC, а также электрофореза в
ПААГ. Активность фермента определяется по хромогенному субстрату. Процесс
очистки контролируется электрофоретическими методами с последующим
выявлением активности фермента в геле-реплике и на нитроцеллюлозной
мембране с использованием п-нитроанилидных субстратов.
- исследовать субъединичную структуру фермента, определить его N-
концевые и внутренние аминокислотные последовательности методом
автоматической деградации по Эдману и масс-спектрометрии.
- сравнить полученные последовательности с имеющимися для цистеиновых
протеиназ большого мучного хрущака и близкородственных организмов. На
основании анализа полученных данных, а также данных об энзиматических
свойствах фермента, выявить структурные особенности исследуемой цистеиновой
протеиназы, ответственные за её необычные свойства.