А.С. Ясная, О.В. Ямскова, Д.Ф. Гуранда, Т.А. Щербакова, В.И. Тишков, В.К. Швядас

Клонирование пенициллинацилазы из Escherichia coli. Каталитические свойства рекомбинантных ферментов

Ген пенициллинацилазы (ПА) из Escherichia coli был клонирован из штамма продуцента ПА, аналога штамма ATCC 11105. Оптимизация условий культивирования позволила получить до 130 мг активного фермента на литр культуральной жидкости. Методом сайт-специфического мутагенеза с помощью ПЦР был получен ряд одиночных, двойных и тройных мутантов. В результате процедур выделения и очистки были получены гомогенные препараты нативного фермента и его мутантов. Исследования показали, что 1) полученные ферменты имеют правильную структуру; 2) комплексоны и катионы металлов не влияют на их каталитическую активность; 3) мутантные ПА, аналогично дикому типу, эффективно инактивируются ФМСФ, что дает возможность титровать их активные центры; 4) полученные мутанты характеризуются большей константой специфичности в реакции гидролиза цветного субстрата, однако уступают дикому типу в синтезе ампициллина методом ацильного переноса.

  Полный текст статьи в формате PDF

Вестник Московского Университета.
Химия 2008, том 49, ? 2, стр. 127-133