Ключевые слова:

адгезия, Yersinia pseudotuberculosis, фторхинолоны, доминирующий клон, недоминирующий клон.

В то же время необходимо отметить, что одним из необходимых факторов существования патогенных бактерий в организме человека является адгезия [3, 4]. Функция распознавания, прикрепление микробов к клеткам макроорганизма детерминируется адгезинами - структурными единицами клеточной поверхности микроба [3, 4, 5]. В настоящее время появились работы, изучающие адгезию и адгезины различных микроорганизмов. В частности, в последние годы фимбрии обнаружены у некоторых штаммов псевдотуберкулезного микроба, выращенных при разных температурах [6, 7].

Между тем в работах последних лет обращается внимание на изучение процессов прерывания адгезии у микроорганизмов [4, 5, 8]. Обнаружено, что адгезины микробов чувствительны к влиянию антибиотиков при выращивании бактерий в питательной среде, содержащей суббактериостатические концентрации антибиотика [8].

Анализ литературных данных по фторхинолонам показал, что субингибирующие концентрации данных химиопрепаратов уменьшают адгезию ряда микроорганизмов (Е.соli, Streptococcus spp. и S.aureus) [9, 10].

В связи с этим целью настоящей работы явилось изучение влияния некоторых препаратов группы фторхинолонов (ципрофлоксацина, пефлоксацина, норфлоксацина) на процесс адгезии к клеткам макроорганизма у штаммов, доминирующих или недоминирующих в поликлональной популяции Y.pseudotuberculosis.

Материал и методы

Таблица 1. Штаммы Y.pseudotuberculosis, использованные в экспериментах по прерыванию адгезии фторхинолонами
Серовар	Спектр плазмид в МДа	Kоличество штаммов	Место выделения
1а	45	4	Чукотка
1b	82:48	7	Якутия
	82:48:3,5:2,7	8	г. Москва
	82:48:3,5	8	г. Москва
	48:4,4	1	Kемеровская обл.
	82:48:2,7	1	Kемеровская обл.
	82:48:37:34:2,3	1	Kемеровская обл.
	82:48:37:28	1	Kемеровская обл.
	82:48:40:36	1	Kемеровская обл.
3	45	1	г. Владивосток
4b	45	1	Приморский край

Исследуемые препараты группы фторхинолонов: ципрофлоксацин (субстанция, активность 85%), норфлоксацин (субстанция, активность 99,5%), пефлоксацин (субстанция, активность на сухое вещество 78,4%). Данные препараты синтезированы в Уральском политехническом университете.

Изучение влияния фторхинолонов на адгезивный процесс проводили по методике, предложенной В.И. Брилис с соавт. [11]. В качестве буфера использовали 0,15 М раствор фосфата натрия, приготовленный на изотоническом растворе хлорида натрия (рН 7,2). Готовили суточные культуры штаммов Y.pseudotuberculosis в разведении 10⁹ микр. кл/мл по оптическому стандарту мутности производства ГИСК им. Л.А Тарасевича. Клеточным субстратом служили нативные эритроциты человека О (I) группы Rh (+) в концентрации 0,5%, предварительно дважды отмытые буферным раствором путем центрифугирования (300-1000 об/мин). Концентрация антибиотиков составляла 1 мг/мл. Адгезивные свойства оценивали под световым микроскопом с вычислением среднего показателя адгезии (СПА) - среднего количество микробов, прикрепившихся к 1 эритроциту, при подсчете не менее 25 эритроцитов, учитывая не более 5 эритроцитов в одном поле зрения.

Результаты исследований

Более выраженный ингибирующий эффект отмечен у ципрофлоксацина и норфлоксацина. Так, адгезия Y.pseudotuberculosis под действием ципрофлоксацина снизилась в среднем до 63,95%, норфлоксацина до 65,5% и пефлоксацина до 73,64% от исходного уровня.

Однако действие данных препаратов неоднозначно для изученных бактерий псевдотуберкулеза. Снижение средних показателей адгезии под влиянием ципрофлоксацина, пефлоксацина и норфлоксацина обнаружено у 19 штаммов. Вместе с тем для 8 штаммов было установлено повышение средних показателей адгезии, а для 7 штаммов - снижение или повышение адгезивных свойств под влиянием одного из трех фторхинолонов.

Мы сопоставили наши результаты по ингибированию адгезии Y.pseudotuberculosis под действием ципрофлоксацина, пефлоксацина и норфлоксацина в соответствии с тем, является ли тот или иной штамм доминирующим или недоминирующим в популяции микроба. В результате изучения определились две группы штаммов Y.pseudotuberculosis (табл. 2). В первой группе (16 штаммов) оказались штаммы, недоминирующие в поликлональной популяции микроба, во вторую группу попали 18 штаммов, которые доминировали в изучаемой популяции бактерий.

Таблица 2. Влияние фторхинолонов на средние показатели адгезии (СПА) штаммов Y.pseudotuberculosis в зависимости от доминирования клона
Показатели	СПА у недоминирующих штаммов Y.pseudotuberculosis, (n=16)				СПА у доминирующих штаммов Y.pseudotuberculosis, (n=18)
	Kонтроль	ЦФЛ	ПФЛ	НФЛ	Kонтроль	ЦФЛ	ПФЛ	НФЛ
М m	3,0 0,3	1,42 0,28	1,44 0,31	1,085 0,19	1,49 0,19	2,4 0,16	2,61 0,39	2,85 0,23
p		<0,01	<0,01	<0,01		<0,01	<0,05	<0,01

Примечание. Здесь и в табл. 3, 4: ЦФЛ - ципрофлоксацин, ПФЛ - пефлоксацин, НФЛ - норфлоксацин.

Как видно из табл. 2, штаммы, недоминировавшие в популяции, под действием фторхинолонов снижали адгезивную активность.

В большей степени снижение адгезивных свойств у штаммов Y.pseudotuberculosis отмечалось под действием норфлоксацина, СПА для ципрофлоксацина и пефлоксацина было почти одинаковым. В то же время у штаммов, доминировавших в поликлональной популяции, средний показатель адгезии к эритроцитам, наоборот, повышался. Это характерно для действия всех трех изученных фторхинолонов.

При более детальном рассмотрении каждой группы в отдельности установлено, что в первой группе находились четыре штамма Y.pseudotuberculosis серовара 1а, одиннадцать штаммов серовара 1b и один штамм серовара 3. У штаммов серовара 1b и 3, относящиеся к недоминирующим, под влиянием трех фторхинолонов отмечалось снижение адгезивности у микроорганизмов (табл. 3).

Таблица 3. Влияние фторхинолонов на средние показатели адгезии у штаммов Y.pseudotuberculosis сероваров 1b и 3, недоминировавших в поликлональной популяции
Серовар, спектр плазмид в МДа	Номер штамма	Kонтроль (без фторхинолона)	ЦФЛ	ПФЛ	НФЛ
1b - 82:48:3,5	Н-406	3,12	1,07	0,78	0,31
	Н-407	1,74	1,07	0,51	0,9
	Н-408	1,98	0,65	0,68	0,46
	Н-409	2,08	1,48	0,56	0,73
	Н-2538	4,12	1,16	0	0,86
	Н-2539	1,55	0,76	0,66	0,69
1b - 82:48:37:28	Н-224	3,45	1,66	1,76	0,33
1b - 82:48:40:36	Н-1266	4,19	0,66	0,62	0,97
1b - 82:48:37:34:2,3	Н-335	1,69	0,65	0,5	1,07
3-45	Н-4052	2,45	1,15	1,07	0,87
1b - 48:4,4	Н-3887	2,14	1,18	0,6	0,87
1b - 82:48:2,7	Н-3900	3,63	1,05	1,97	1,18
1а - 45	N 489-907	5,23	0,94	2,44	3,15
	N 488-825	4,16	1,2	4,81	2,26
	N 496-1014	4,76	5,13	2,88	0,69
	N 995-500	1,78	3,0	1,82	2,02

Неоднозначные результаты получены при исследовании четырех штаммов Y.pseudotuberculosis серовара 1а с особым вариантом плазмиды вирулентности (REAP - тип А), которые выделены только на Чукотке и не обнаружены в других районах мира [12]. Под влиянием ципрофлоксацина, пефлоксацина и норфлоксацина у близкородственных штаммов данного серовара имела место вариабельность адгезивных свойств. Снижение адгезии под влиянием всех трех фторхинолонов обнаружено только у одного штамма (N 489-907). Более выраженным он был под действием ципрофлоксацина, средний показатель адгезии микроорганизмов этого штамма по сравнению с контролем снизился в 5,6 раза. Напротив, все три фторхинолона увеличивали эффект адгезивности штамма N 995-500. Что касается штамма N 488-825, то эффект ингибирования адгезии наблюдался под влиянием только ципрофлоксацина и норфлоксацина (в 1,2 и 2,3 раза соответственно по сравнению с контролем). Пефлоксацин же, напротив, усиливал адгезию данного микроба на клетках. Штамм N 496-1014 также проявлял себя в этом эксперименте по-разному. Все три химиопрепарата изменяли его адгезивные свойства - ципрофлоксацин в 1,1 раза повышал, а норфлоксацин и пефлоксацин снижали их соответственно в 6,9 и 1,6 раза. Следовательно, в пределах данного серовара ципрофлоксацин, пефлоксацин и норфлоксацин неодинаково влияют на адгезивные свойства микроорганизмов.

Далее...