Доклиническое исследование ксимедона

Военно-медицинский институт Нижегородской медицинской академии, Казанский государственный медицинский университет, Институт органической и физической химии Казанского научного центра РАН, Казанская медицинская академия

АНТИБИОТИКИ И ХИМИОТЕРАПИЯ, 1999-N8, стр. 12-17.

В начало...

Проведенные гистологические исследования и изучение упругости послеоперационного рубца, величина которой находится в прямой зависимости от интенсивности коллагеногенеза, подтверждали положительный эффект ксимедона. В табл. 3 представлен модуль упругости при разрыве (Е₁) и текучести (Е₂) рубца на 5-й день после операции у животных опытной и контрольной групп.

Таблица 3. Модуль упругости послеоперационного рубца на 5-й день после операции с применением и без применения ксимедона (М m)
Группа животных	Модуль упругости (Е*103 Па)
	Е1	Е2
Kонтрольная	1,9 0,2	0,6 0,005
Опытная	3,3 0,4	0,9 0,006
р	<0,01	<0,001

Модуль упругости в момент текучести после операционного рубца (Е₂) в опытной группе выше на 33,3% по сравнению с контрольной, что указывает на более совершенную архитектонику вновь образованных коллагеновых волокон и прочность их поперечных связей. Модуль упругости при разрыве рубца (Е₁) в опытной группе по сравнению с контрольной больше на 42,1% (р<0,01), что свидетельствует о большем количестве организованных коллагеновых волокон, синтезированных под действием ксимедона.

Из анализа диаграмм растяжения кожного лоскута с рубцом на 5-й день после операции выявлено, что напряжение рубца у животных опытной группы при меньшей текучести (Т) составило (19,2 2,5)*10⁴ Па, а в контрольной группе (11,4 1,6)*10⁴ Па. Разница статистически достоверна в пользу ксимедона (р<0,05). Это еще раз подтверждало, что у животных, получавших ксимедон, наблюдалось раннее образование коллагена в ране по сравнению с контрольной группой и процессы репаративной регенерации проходили равномерно по всей площади рубцовой ткани.

В группе животных с применением метилурацила на 5-й день после операции напряжение разрыва рубца (В) составило (26,6 2,0)*10⁴ Па, а напряжение рубца при текучести (Т) - (12,2 1,7)*10⁴ Па. Таким образом, по сравнению с метилурацилом напряжение рубца под действием ксимедона при текучести больше на 36,5% (р<0,05), а при разрыве на 21,5% (р<0,05). Это свидетельствует о том, что ксимедон по своим стимулирующим свойствам на процессы репаративной регенерации превосходит свой аналог - метилурацил.

Из приведенных результатов можно сделать вывод, что процессы репарации наиболее равномерно распределяются по всей длине раны у животных опытной группы. Это является немаловажным признаком, характеризующим качество репаративных процессов. Данные тензиометрии согласовывались с результатами гистологических исследований.

В контрольной группе животных на 5-й день раневого процесса происходило стягивание краев раны с образованием небольшого участка грануляционной ткани. По ходу раневого канала отмечалась лейкоцитарная инфильтрация. На 9-й день эпидермальный регенерат разрастался. Грануляционная ткань становилась волокнисто-клеточной, фуксинофильные коллагеновые волокна выявлялись тонкие и располагались в основном параллельно поверхности кожи. К 14-му дню втянутость рубца оставалась. Коллагеновые волокна в дерме утолщались и сплетались в пучки. В область дефекта дермы продвигались волосяные луковицы и железы. В клеточном составе соединительнотканного регенерата начинали преобладать фибробласты и фиброциты. К 21-му дню рубец оставался втянутым. Под эпидермисом формировался соединительнотканный каркас с преобладанием достаточно зрелых волокон, окрашивающихся фуксином, которые сплетались в пучки и образовывали сложную архитектонику. В глубине бывшего дефекта новообразованные волокна переплетались с соседними коллагеновыми волокнами.

В опытной группе животных с применением ксимедона в линейной ране на 5-й день после операции отмечалось меньшее количество грануляционной ткани по сравнению с контрольной группой. Начинали образовываться нежные коллагеновые волокна, которые к 7-му дню приобретали горизонтальную ориентацию. В клеточном составе имелись макрофаги и молодые фибробласты. К 9-му дню поверхность линейной раны покрывалась мощным эпителиальным пластом с погруженными выростами. Грануляционная ткань становилась волокнисто-клеточной, коллагеновые волокна начинали сплетаться в пучки, рубец становился малозаметным. На 14-й день область бывшего разреза была трудно различима, волокнистая часть дермы оставалась несколько разреженной и имелось довольно много кровеносных сосудов.

Морфологическое исследование кожных ран позволяет сделать вывод об ускорении репаративного процесса при введении ксимедона, который оказывал заметное стимулирующее влияние на образование коллагена в послеоперационной ране, объясняющее повышение прочностных и упругих характеристик рубцовой ткани.

Гистологические исследования плоскостной раны при использовании ксимедона выглядели следующим образом. На 3-й день плоскостная рана покрывалась плотным струпом, основа которого гомогенно окрашивалась эозином. В составе струпа много клеток крови. Грануляционная ткань, заполняющая дефект, клеточно-волокнистого типа с большим количеством новообразованных сосудистых петель. Если в поверхностных зонах раны преобладали полиморфноядерные лейкоциты, то по мере продвижения вглубь их замещали лимфоциты и фибробласты.

К 7-му дню в плоскостной ране, поверхность которой покрыта струпом, эпителий в краевых участках наползает на грануляционную ткань, в клеточном составе ее представлены макрофаги, фибробласты и полиморфноядерные лейкоциты. К 14-му дню большая часть поверхности покрыта новообразованным эпидермисом, который прорастает под струп. В грануляционной ткани - активный процесс фибриллогенеза, коллагеновые волоконца сплетены в пучки. В клеточном составе преобладают фибробласты и полиморфноядерные лейкоциты. К 20-му дню "вырезанная рана" полностью покрылась эпидермальным регенератом, близким по строению к нормальному эпидермису, покрывающему кожу крысы, однако ни волосяных фолликулов, ни желез не видно. Хорошо определяется выраженное послойное строение эпидермиса, роговой слой которого достаточно массивен.

Итак, по данным экспериментальных исследований, ксимедон при энтеральном способе введения существенно способствовал увеличению прочностных параметров сращения краев кожной раны. Выраженность стимулирующего действия ксимедона на заживление ран максимально проявлялась в первые 5-7 дней после повреждения. В обширной плоскостной ране наблюдалось ускорение коллагеногенеза.

С целью изучения влияния ксимедона на заживление ран пищеварительного тракта проведены исследования на кроликах, которым наносились повреждения желудка по разработанной нами методике (АС N 1827621, 1994) под внутривенным наркозом.

В послеоперационном периоде животным внутрижелудочно вводили ксимедон в виде 10% водного раствора из расчета 100 мг/кг в сутки (первая опытная группа). Вторая опытная группа получала 0,9% водный раствор метилурацила в той же дозе. Контрольную группу составили кролики, получавшие изотонический раствор хлорида натрия. На 3-, 5- и 7-е сутки после эвтаназии животных проводилось исследование прочности на разрывы тканей желудка и двенадцатиперстной кишки (РЖДК) в зоне ушитых повреждений методом пневмопрессии.

На 5-е сутки после применения ксимедона РЖДК в зоне рубца получены в 83% случаев при пневмопрессии до 180 мм рт. ст.; во второй опытной группе - в 57,1% случаев на 5-е сутки рубец выдерживал пневмопрессию до 100 мм рт. ст. В контрольной группе животных показатели были заметно меньшими, чем во второй и особенно в первой группах. На 7-е сутки во второй группе РЖДК в области рубца получены в 80% случаев при пневмопрессии до 120 мм рт. ст., а в первой группе - в 26,6% при давлении до 145 мм рт. ст.

Представляют интерес данные анализа РЖДК вне ранее нанесенного повреждения. На 5-е сутки в первой группе разрывы вне рубца наблюдались в среднем при пневмопрессии 180 мм рт. ст., на 7-е сутки эти цифры колебались в пределах от 170 до 240 мм рт. ст. Во второй группе животных в большинстве случаев разрывы вне рубца получены на 5-е сутки при пневмопрессии 160 мм рт. ст., а на 7-е сутки эти показатели составили в среднем 180 мм рт. ст. Показатели в контрольной группе не отличались от результатов при применении метилурацила.

Итак, ушитые повреждения желудочно-кишечного тракта после применения ксимедона имеют гораздо большую прочность, чем после применения метилурацила. Данное положение убедительно доказывается тем, что рубец после применения ксимедона разрывается в большем проценте случаев при давлении, существенно превышающем таковое при применении метилурацила, как на 5-е, так и на 7-е сутки. Устойчивость тканей желудка и двенадцатиперстной кишки к пневмопрессии после использования ксимедона в большей степени проявлялась на более ранних сроках, чем после применения метилурацила. Данные, полученные при анализе разрывов вне рубца, свидетельствуют о том, что ксимедон в большей степени, чем метилурацил, увеличивает прочностные параметры здоровых участков стенки желудка, значительно повышая ее толерантность к растяжению, вызываемому пневмопрессией.

Исследования микроструктуры стенки желудка контрольных животных на 3-й день после операции показали, что краевой участок эпителия несколько утолщен. Собственная пластинка, прилегающая к области травмы, характеризуется кровоизлияниями, возникшими в результате нарушения микроциркуляции, особенно обильными под поверхностным эпителием. В подслизистой основе между волокнами содержится однородная отечная жидкость, в которой выявляются полиморфноядерные лейкоциты с преобладанием малых лимфоцитов. Вокруг сосудов собственного слоя, между разрушенными фундальными железами и в подслизистой основе, наблюдаются небольшие скопления средних и малых лимфоцитов, гистиоцитов, лаброцитов и набухший эндотелий сосудов. В мышечной оболочке вблизи раневого дефекта заметно утолщение соединительнотканной прослойки и проникновение клеточных элементов фибробластического ряда в мышечную ткань.

У животных первой опытной группы на 3-й день поверхность слизистой находится на стадии регенерирующей эпителизации. Кровоизлияния замечены только в области раны под поверхностным эпителием. Наиболее выражена инфильтрация собственной пластинки и подслизистой основы слизистой оболочки клетками лимфоидно-гистоцитарного ряда. Стенка сосудов характеризуется утолщенным эндотелием интимы и часто встречающимися моноцитами в просвете. У животных, получавших метилурацил, в сравнении с контролем процессы регенерации характеризуются усилением пролиферации поверхностных эпителиоцитов. Поверхностный эпителий в этих участках имеет вид многослойного недифференцированного. На 7-й день поверхностный эпителий желудка в области участка травматического повреждения характеризуется наличием клеточного детрита, под которым происходит выраженная регенерация и эпителизация. В прилегающих к участку раны структурах стенки отмечается выраженное полнокровие сосудов основы слизистой. В глубине основы выражены периваскулярные лимфоцитарные инфильтраты с наличием участков микронекрозов соединительной ткани и железистых структур в ней. В подслизистой основе и мышечной оболочке сформирована демаркационная линия, представленная преимущественно лимфоидно-макрофагальными, фибробластическими клетками и единичными псевдоэозинофилами.

Таким образом, регенерация тканей при оперативном вмешательстве с разрезом стенки желудка характеризуется улучшением пролиферации клеток эпителиальной и соединительной тканей при применении метилурацила и ксимедона. При этом следует отметить лучшее влияние ксимедона на регенеративные процессы и васкуляризацию, что свидетельствует о перспективности применения этого препарата в качестве стимулятора репаративной регенерации.

Положительные результаты проведенного доклинического исследования ксимедона могут служить основанием для клинического изучения препарата при различных нозологических формах хирургических заболеваний.

АНТИБИОТИКИ И ХИМИОТЕРАПИЯ, 1999-N8, стр. 12-17.

ЛИТЕРАТУРА

2. Заиконникова И.В., Абдрахманова Н.Г., Горбунов С.М. Ксимедон - лекарственное средство. Фармакология и токсикология фосфорорганических и биологически активных веществ. Казань 1996; 61.

3. Ксимедон. Казань 1986.