Документ взят из кэша поисковой машины. Адрес оригинального документа : http://plantphys.bio.msu.ru/education/protoplast.doc Дата изменения: Tue Jun 7 16:07:13 2011 Дата индексирования: Mon Oct 1 19:45:11 2012 Кодировка: koi8-r Поисковые слова: раствор

Задача 2. Выделение протопластов.

. Цель задачи: выделить протопласты, изучить влияние среды на выделение
протопластов.

. Объект исследования:

. Реактивы и оборудование. Калий-фосфатный буфер (рН 7.5), маннит две
навески по 5г, целлюлаза две навески по 1,0 г, цилиндры на 50 мл, 2 колбы
по 100 мл, стаканчики, стеклянные палочки, маленькие чашки Петри,
препаровальные иглы, лезвие, микроскопы.

. Ход работы:
1. Приготовление растворов маннита (плазмолитик) на К-фосфатном буфере.
Раствор ?1 с=70 г/л, раствор ?2 с=90г/л.
2. Приготовление на основе растворов ?1 и ?2 растворов 2,5% целлюлазы
(сначала растворяют целлюлазу (фермент) в небольшом объеме, затем после
ее растворения доливают оставшийся объем).
3. Наливают приготовленные растворы ?1 и ?2 в две маленькие чашки Петри
(прикрыв раствором дно).
4. Отрезают небольшой (4*4мм) кусочек листа у выбранного объекта (по
кусочку для каждого раствора).
5. Удаляют нижний эпидермис с кусочка ткани.
6. Сразу помещают кусочки в раствор фермента и плазмолитика.
7. Чашки Петри с кусочками ткани оставляют в термостате на 2,5 часа при
370С.
8. Через 2,5 часа вынимают чашки Петри из термостата и смотрят под
микроскопом изолированные протопласты, наводя на зеленые конгломераты в
растворе, если таковых нет , то объект можно пошевелить препаровальной
иглой. Зарисовать найденные протопласты.

Оценить произошло ли разрушение клеточной стенки, качественно оценить
соотношение целых и разрушенных хлоропластов в растворе.


ЛИТЕРАТУРА к зачету:

Полевой В.В. «Физиология растений»: Учеб. для вузов. М.: "Высш.
шк.", 1989.
Бутенко Р.Г Биология клеток высших растений in vitro и биотехнологии
на их основе. М., ФБК-ПРЕСС, 1999.