Документ взят из кэша поисковой машины. Адрес оригинального документа : http://kodomo.cmm.msu.ru/FBB/StudentScience/themes_2006/Chichkova.doc
Дата изменения: Tue Dec 13 19:07:16 2005
Дата индексирования: Sat Dec 22 07:09:55 2007
Кодировка: koi8-r

Поисковые слова: флуоресценция

Темы курсовых работ для третьего курса

1. Разработка системы обнаружения активации каспаз в растениях.

Проблема: Агробактериальный белок VirD2 играет ключевую роль при
переносе бактериальной ДНК в ядро заражаемой растительной клетки.
Показано, что при гиперчувствительном ответе клетки на заражение в ней
активируется протеолитическая активность, функционально аналогичная
каспазам животных, расщепляющая белок VirD2 в определенных местах С-
концевой области. В результате этого расщепления белок теряет сигнал
ядерной локализации и перестает накапливаться в ядре растительной клетки.
Хочется использовать это явление для детекции включения
гиперчувствительного ответа (активации каспаз) при различных
стрессирующих воздействиях на растение.
Предлагается: Создать генноинженерную кострукцию, представляющую собой С-
концевой фрагмент белка VirD2, слитый с репортерным флуоресциирующим
белком таким образом, что при каспазном расщеплнии продукта этого гена
репортерный белок будет терять сигнал ядерной локализации и менять
ядерную локализацию на цитоплазматическую. Конструкция будет введена в
бинарный вектор, способный трансформировать агробактерии. В рамках
продолжения курсовой работы предполагается с помощью этих агробактерий
получить трансгенные растения, несущие данную конструкцию. Ожидается, что
в ответ на разнообразные стрессы будет происходить перераспределение
флуоресценции из ядра в цитоплазму, детектируемое с помощью
флуоресцентного микроскопа.

2. Использование суспензионных культур растительных клеток и протопластов
для исследования активации каспазной активности.
Проблема: В ответ на различные стрессирующие воздействия в растительных
клетках активируется программа, приводящая к их быстрой гибели. Одним из
основных участников этого процесса является обнаруженный в лаборатории
Молекулярной биологии гена фермент, функционально аналогичный каспазе-3
человека. Попытки исследовать активацию этого фермента на целых растениях
натолкнулись на ряд принципиальных трудностей. Настоящая работа - попытка
их обойти, используя систему изолированных клеток.
Предлагается:
1) Получить суспензионные культуры клеток и протопластов табака как
дикого типа, так и трансгенного по флуоресцентному белку-репортеру
- субстрату растительной каспазы.
2) Исследовать активацию растительной каспазы в ответ на различные
стрессирующие воздействия с помощью флуоресцентной микроскопии и
клеточной флуориметрии.
3) Исследовать влияние транзиентной экспрессии различных участков
агробактериального белка VirD2 как активатора клеточной смерти на
выживаемость протопластов.


Руководитель: Нина Валентиновна Чичкова
НИИ ФХБ им. А.Н.Белозерского,
Лаборатория Молекулярной биологии гена, корп.Б, к.419